绵羊卵丘细胞直径与卵母细胞质量的相关性-江苏农业科学.PDFVIP

— ２３６— 江苏农业科学　２０１４年第４２卷第１２期 古丽米热·阿布都热依木，吴阳升，林嘉鹏，等．绵羊卵丘细胞直径与卵母细胞质量的相关性［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１２）：２３６－２３９． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１４．１２．０８１ 绵羊卵丘细胞直径与卵母细胞质量的相关性 １，２ ２ ２ ２ ２，３ ２，３ １，２ １，２ ２ 古丽米热·阿布都热依木 ，吴阳升 ，林嘉鹏 ，汪立芹 ，张　利 ，蒋香菊 ，杨　楠 ，唐淑红 ，黄俊成 （１．新疆农业大学，新疆乌鲁木齐８３００００；２．新疆畜牧科学院动物生物技术研究中心，新疆乌鲁木齐８３００００； ３．石河子大学动物科技学院，新疆石河子８３２０００） 　　摘要：利用 ＲＴ－ＰＣＲ方法，检测不同直径绵羊卵泡卵丘细胞中ＦＳＨＲ、ＥＧＦＲ、ＧＨＲ、ｂＦＧＦ、ＣＹＰ１９Ａ、ＡＭＨ基因的 ｍＲＮＡ表达规律及卵母细胞孤雌激活后胚胎发育的影响，结果表明，大、中、小卵泡卵丘细胞中都有 ＦＳＨＲ、ＥＧＦＲ、 ＧＨＲ、ｂＦＧＦ、ＣＹＰ１９Ａ、ＡＭＨ的ｍＲＮＡ表达，不同直径卵泡卵丘细胞呈现递增趋势，大卵泡卵丘细胞与中小卵泡的卵丘 细胞相对表达量差异显著（Ｐ＜０．０５）；ＡＭＨ在直径 ＞５．０ｍｍ的卵泡卵丘细胞中有所下降。不同大小卵泡卵母细胞 经体外培养，结果表明，各卵泡卵母细胞直径组间成熟率不显著，随卵泡直径的增大卵裂率增加，１．０～２．０ｍｍ组与 ２．１～５．０ｍｍ组卵裂率都显著低于＞５ｍｍ组 （Ｐ＜０．０５），相互间无差异（Ｐ＞０．０５）；囊胚率也呈现逐渐增加的趋势， 卵泡大于５．０ｍｍ卵母细胞组极显著高于１．０～２．０ｍｍ组（Ｐ＜０．０１），２．１～５．０ｍｍ组（Ｐ＜０．０５）。证实卵丘细胞在 绵羊卵母细胞成熟和受精及随后的胚胎发育过程中起重要作用，卵泡直径对卵母细胞发育能力产生影响。 　　关键词：绵羊；卵丘细胞；卵母细胞；ＲＴ－ＰＣＲ 　　中图分类号：Ｓ８２６．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）１２－０２３６－０４ 　　准确判断卵母细胞的发育能力是提高各类辅助生殖成功 表达差异，以推断这些基因对卵母细胞发育能力的影响，对预 的必要条件，从形态学上观察卵母细胞的厚度及卵丘细胞包 测卵母细胞体外发育能力有着重要的意义。ＲＴ－ＰＣＲ方法 裹的紧密程度是评估卵母细胞质量的常用手段［１－２］，这种标 克服了通过表观参数而选择卵母细胞的不可靠性，是一个非 准并不能真正预测胚胎的健康，需要从分子角度鉴定预测卵 侵入性辨别卵母细胞质量的新方法。 母细胞的功能。卵丘细胞是指在卵母细胞外周并与之进行代 １　材料与方法 谢联系的颗粒细胞群，对于卵母细胞成熟有极其重要的作用， 主要表现在卵丘细胞参与维持卵母细胞减数分裂阻滞、诱导 １．１　材料 卵母细胞减数分裂恢复并支持卵母细胞细胞质的成熟。卵丘 １．１．１　药品及试剂　ＲＮｅａｓｙＭｉｃｒｏＲＮＡ提取试剂盒、ＱＩＡＥＸ 细胞形态和卵丘细胞扩展影响卵母细胞成熟的同时，卵母细 ＩＩ琼脂糖凝胶回收试剂盒，均购于 ＱＩＡＧＥＮ；反转录试剂盒 ［３］ 胞对卵丘细胞的分化及发育也起着中心调节作用 。Ｌｉ等 ＲＮＡＬＡ－ＰＣＲ（ＡＭＶ）、荧光实时定量 ＰＣＲ试剂盒 ＳＹＢＲ 研究证明卵母细胞对卵丘细胞表型和生存有重要的调节作 ＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶、ｐＭＤ１９－Ｔ载体，均购于大连 用，对卵丘细胞增殖、扩散、分化及细胞死亡、类固醇激素分泌 宝生物公司；培养用胎牛血清 （ＦＢＳ）、非必需氨基酸 有显著影响［４－５］。最近，Ｌｅｄｄａ等提出，卵泡液和卵丘细胞可 （ＮＥＡＡ），均购自Ｇｉｂｃｏ公司；牛血清白蛋白（ＢＳＡ），购自 贮存及释放某些生长因子和某些特定蛋白质，在卵母细胞成