200型凯氏定氮仪对低蛋白量样品的检测准确度与.PDFVIP

SKD-200定氮仪的实验报告 实验目的：验证沛欧SKD- 200型凯氏定氮仪对低蛋白量样品的检测准确度与精确度 实验设计人：沙金 实验执行人：沙金 实验时期：2010-3-11 仪器与试剂： 凯氏定氮仪（SKD-200，上海沛欧分析仪器有限公司） 精密分析天平（FA2004，上海精科天平厂） 通风橱 水槽 500mL三角瓶若干 25mL酸式滴定管 50mL量筒 1mL移液器与枪头 10mL离心管 药匙 称量纸 固体硫酸钾/硫酸铜催化剂=3:1（w/w） 样品1：0.5mg/mL BSA 2mL（containing 50% glycerol） 样品2：0.5 mg/mL 大豆浸提液 2mL (containing 50% glycerol） 样品3：标准硫酸铵 (1mg N/mL) 空白对照：saline (containing 50% glycerol） 浓硫酸(AR) 35% NaOH 2% H BO 3 3 混合指示剂：0.1%溴甲酚绿乙醇溶液:0.1%甲基的红乙醇溶液=5:1 0.1N NaOH 0.1N HCl 0.01037N 滴定用HCl 操作步骤： 1. 消化： 将预先称量好的固体硫酸钾/硫酸铜催化剂粉末约6g（可适当加量）小心加 入洗净干燥的消化管底部；分别将样品1、2和空白对照（约2mL）各两份用分析 天平差减法直接倒入消化管底部，记录各组重量；用量筒小心称取浓硫酸16mL 加入各消化管底部。将消化管放在管架上，放入消化炉，启动通风橱。设置消 化温度时间曲线：170℃（根据样品碳化和沸腾的情况，可适当提高或降低预消 化温度，并尽量避免样品碳化沸腾挂壁以提高检测准确度），30min—— 250℃，10min—— 370℃（为保证消化效果，可根据情况适当提高至400℃以上），120min。当消 化管内出现稳定的恒沸白色酸雾并回流时，可盖上消化管盖以减少硫酸损失。 当样品被消化为明亮的蓝绿色或绿色液体时，即可停止消化，待其冷却至室温 后，取出蒸馏，关闭通风橱。 2. 蒸馏： 向凯氏定氮仪的三个储液桶中分别加入足量的35%NaOH、2%H BO 和蒸馏水（ 3 3 根据处理样品量，至少1L），旋紧储液桶盖子。开机，打开循环水，不放入样 品，预蒸馏2min。向样品管中小心加入20mL蒸馏水以稀释硫酸，待其变为明亮 的蓝色溶液时，小心放入蒸馏架，卡紧卡槽时注意将消化样品管口卡紧以防止 氨蒸气流失；向500mL接收三角瓶中加入少量（约0.6mL）混合指示剂，并设定 加硼酸12s，加碱8s，蒸馏8— 9min，保存设置后启动仪器。当氨蒸气随冷凝水流出时（注意氨蒸气管出口浸 没于接收三角瓶的硼酸溶液中），接收瓶中的硼酸溶液会由玫红色变为蓝色， 待蒸馏完毕，用蒸馏水将氨蒸气管出口的残液冲洗入接收瓶后取出待测。将样 品管取出，小心倒入水槽，并及时清洗。放入下一个样品管和接收瓶，重复以 上操作。蒸馏完毕后，关闭循环水。待蒸馏水冷却后放出。如短时间内不再使 用定氮仪，应用蒸馏水替换酸液和碱液，重复加酸加碱过程以清洗酸碱管路， 维护设备。 3. 滴定 用0.1N NaOH、0.1NHCl、蒸馏水分别润洗酸式滴定管各三次，最后用0.01037N滴定用标 准HCl润洗两三次。加入0.01037N滴定用标准HCl，并小心放液至0刻度。开始滴 定，左手控制滴定速度，右手不断摇动混匀三角瓶中溶液。（可预先对样品消 耗盐酸量有一个大致的估计，即每毫升0.01N盐酸可滴定约0.14mg氮）临近滴定 终点时溶液开始由蓝色变为蓝灰色，在最后一滴或半滴时微微呈现紫红色。视 线与滴定管水平时读取并记录盐酸消耗量。用0.01037N滴定用标准HCl补满至0 刻度后，可滴定下一个样品。 实验结果： 1. 各组样品取样量： 空白对照 BSA (0.