用于热循环的VeriFlex温度控制技术-ThermoFisherScientific.PDFVIP

应用说明3 VeriFlex 温度控制技术 用于热循环的VeriFlex温度控制技术 简介 温度循环是所有PCR的基础，PCR仪性能对于您和您的研究具有至关重要的作 用。温度、变温速率和保持时间是影响PCR反应成功的关键参数。高性能PCR 仪必须能够精确控制液体(反应)温度和保持时间，不受反应体积的影响。PCR 仪对温度和保持时间的控制在PCR优化实验中具有更重要的作用。PCR仪必须 在正常PCR和PCR优化运行过程中提供相同的性能。本文分析了采用A pplied Biosystems™ VeriFlex™温度控制技术或传统梯度加热模块的仪器的构造，并对 其性能进行比较。 图1. 线性梯度温度。 什么是梯度温度控制？ 梯度温度控制是帮助用户进行PCR优化实验的特性之一，以便确定PCR实验方 案的最佳温度和保持时间，尽量减少实验次数。在理论上，真正的梯度应在均 匀的金属加热模块上显示线性温度斜率，如图1所示。 目前市场上的梯度PCR仪的结构都是在均匀的金属加热模块下方有两个独立的 加热/冷却元件，如图2所示。这种设计存在如下限制： 图2. 梯度PCR仪的结构。 • 在梯度PCR仪中，用户只能设置两个温度，无法控制加热模块上的其他区域的 温度。 • 由于均匀的金属加热模块两端设置的高温和低温之间的热学相互作用，无法 实现真正的线性梯度。实际上，均匀的金属加热模块上的温度更多呈S形曲线 而非线性梯度，如图3所示。 图3. 非线性梯度温度。 什么是VeriFlex加热模块温度控制？ 采用VeriFlex技术的PCR仪在3个或更多金属加热模块下方 分别有3个或更多独立的加热/冷却元件，如图4所示。每对 加热/冷却元件和金属加热模块相互之间完全隔离，有助于 防止热学相互作用。因此，VeriFlex技术可以在金属加热模 块上实现真正的线性温度斜率，如图1所示，最多设置多 达6种不同的温度。用户可以单独设置各个温度区域，更 好地控制温度优化。 图4. VeriFlex加热模块结构。 VeriFlex技术与传统梯度的比较 材料与方法 孔A3 、A7和A 11的位置5温度测试点 采用本部分所述的相同的设备和方法对表1中的仪器进行 测试。 表1. 测试的仪器。 加热盖温度测试点 型号名称 货号 Eppendorf Mastercycler Nexus Gradient 6331 000.017 带状电缆 Eppendorf Mastercycler Nexus GX2 6336 000.015 Bio-Rad C1000 Touch 96孔 185-1196 Bio-Rad T 100 186-1096 Applied Biosystems ProFlex 1 x 96孔 4484075 VeriFlex技术与传统的梯度加热模块的准确度比较 Applied Biosystems SimpliAmp A24811 在本研究中，利用梯度或VeriFlex加热模块技术改变温度， SensoQuest LabCycler 011-101, 012-103 ° 测试各仪器。使用60 C (常用的退火温度