[生物学]重组P53的研究与开发.pptVIP

重组人p53腺病毒(rAd-p53)是一种广谱抗癌制品。自1995年在美国批准进入临床试验，目前已有51项各种临床试验方案在世界各国实施，涉及到多种类型的肿瘤治疗。所有临床试验用rAd-p53制品均来源于美国和中国的三家公司即Introgen、Schering-Plough（先灵葆雅 ）和深圳市赛百诺基因技术有限公司（SiBiono），这也是目前世界上具有重组腺病毒制品规模化生产能力的三大产业化基地。 国外重组人p53腺病毒制品对肿瘤基因治疗的临床研究 类似药物 近年来,随着对p53 基因广泛深入的研究,p53 家族的其他成员不断被发现,其中p73 基因是p53基因家族中被发现的第一个成员。 P73 基因编码的蛋白质,无论在结构上,还是在功能上均与P53蛋白相似,且与肿瘤的发生密切相关,可抑制细胞增殖,诱导凋亡。深入了解它们彼此的相似性、差异性,可对研究肿瘤的发生机制和对肿瘤的基因治疗提供帮助,为最终攻克癌症带来希望。 P73 作为第一个被发现的P53基因家族的成员———p73基因,与p53基因共同组成了一个抑癌基因家族,自1997年被发现以来,作为候选的抑癌基因倍受研究者的关注。 p73 蛋白与p53 蛋白相似,由1-54 ,131-310 ,345-380 位氨基酸依次组成N2端转录激活区、核心DNA 结合区、C2端寡聚体化区和C2端非特异结合区。分别与p53的4 个氨基酸序列有29 %、63 %、38 %和33 %的同源性。p73 中存在与p53 的MDM22 结合区类似的顺序,MDM22 和MDM2X结合使结构稳定而不象p53 一样被降解。以上特点表明,p73 与p53 在靶DNA 结合方面具有高度同性;p73 和p53 的转录激活功能相似;但p73和p53 可能存在不同的调控方式。 p73 基因作为p53 家族成员,由于它和p53 基因具有高度的序列同源性,结构和功能的相似性,通常被认为是一个新的侯选抑癌基因,但它与P53 又存在不同的地方:p73 的突变率很低,遗传基因表达通常为单基因表达,在DNA 损伤时一般不应答,在细胞生长发育过程中,诱导p53 不能诱导的ADA靶基因等。通过对p73 结构、功能以及诱导、活化调控机制的进一步研究,可对肿瘤发生发展的机制有新的了解,并且可以为今后肿瘤基因治疗提供新的思路。 重组P53的研究与开发 P53进化树 基本概念 P53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，是通过杂合缺失鉴定的一种抑癌基因，在星形细胞癌、乳癌、肺癌、肠癌及骨肉瘤中都有高频率缺失现象 。 该基因编码一种分子质量为53kDa的磷酸化蛋白质，命名P53。 P53主要集中于核仁区，能与DNA特异结合，其活性亦受磷酸化调控。P53在S期磷酸化，其抑制细胞分裂的活性消失。正常P53的生物功能好似“基因组卫士”，在G1期检查DNA损伤点，监视细胞基因组的完整性。如果损伤，P53蛋白阻止DNA复制，以提供足够的时间使损伤DNA修复；如果修复失败，P53蛋白则引发细胞程序性死亡阻止具有基因损伤、可能诱发癌变的细胞产生；如果P53基因的两个拷贝位点发生了突变，对细胞的增殖失去控制，导致细胞癌变。 正常人与患者部分P53基因的比较 P53蛋白N一端为酸性区1～80位氨基酸残基，C-端为碱性区319～393位氨基酸残基，正常的P53蛋白在细胞中易水解，半衰期为20分钟，突变的P53蛋白半衰期为1.4～ 7小时不等。 目前认为，P53失活机理是，野生型P53以四聚体形式与特异位点结合，反式激活 下游生长抑制基因的表达，一系列的方式能使P53失活，在一些肿瘤中，单一或两个 P53位点的丧失降低四聚体浓度，无义突变造成P53翻译中断，C端酸性结构域的丢失影响四聚体形成;最常见的是错义突变，野生型与突变体形成更稳定的四聚体，丧失正常功能。 P35有5个保守区(见图1) 13一19、117~142、171一181、236~258和270~288aa 在正常细胞内,p35能在野生型和突变型表型之间转换。Milner提出p53的构形理论,认为在正常情况下,p53具有两种构形,互相转换。 (1) 促进模式 细胞经生长因子激活后,p 5 3 呈现突变型构形, 部分p 53 从核到质, 并失去抗增殖性能, 细胞持续分裂, 易于转化瘤变。 (2) 阻遏模式 细胞在限制或停止生长条件下, p 53 呈现野生型构形, 绝大部分p 53 位于核内, 阻止细胞增殖, 停顿于G l 期, 倾向于分化 作用机制 从癌细胞中得到的p53基因，其保守序列区有单一位点的突变，推测可能由于这一突变导致p53基因产物结构与