填补Qiagen空白的植物RNA提取试剂盒包括多糖多酚困难样品.PDF

中国试剂网 8 填补Qiagen 空白的植物RNA 提取试剂盒 （包括多糖多酚困难样品） 填补Qiagen 空白、不用DNA 酶消化的植物RNA 提取试剂盒 一般公司多糖多酚植物RNA 提取试剂盒失败原因和解决方案 很多植物RNA 的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造 成RNA 提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复 杂。手工的CTAB 类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。 一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega 等进口试剂盒也无法满足科 研工作者对植物RNA 提取的要求。 下面我们来分析一下植物RNA 为什么不能提取成功的原因： 市面上最常见的RNA 提取试剂盒无非是两种：第一种：TRIzol 改良类方法 （包 括溶液型的和离心柱型的）、第二种：直接裂解过柱子的方法 （离心柱） 第一种试剂盒失败的原因 1：RNA 市面上面最流行的方法就是 TRIzol ，或者 TRIzol 改良，或者TRIzol 加离心柱一类的改良方法。TRIzol 也就是异硫*酸胍/ 苯酚/氯仿原理一步法的方法最适合的对象是动物源性的组织细胞，针对普通多 糖多酚低的植物性的材料，TRIzol 类原理产品也可以提取。但是多糖、多酚、次 级代谢产物丰富的情况下，TRIzol 类方法无法防止多糖多酚对于 RNA/DNA 分 相的干扰，要么残留大量 DNA ，要么残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物， 氧化破坏 RNA ，或者残留这些多糖多酚，色素代谢产物等抑制下游的反转录等 反应。限于技术水平的限制，市面上绝大多数的国产厂家是使用TRIzol 的方法 进行改良，无论是不是加了离心柱。但是实践证明，改良不能从根本上解决问题。 判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单：是否裂解液含有苯酚的味道和使 用氯仿，如果使用到了氯仿就是TRIzol 方法的改良。 中国试剂网 8 第二种试剂盒失败的原因：直接裂解过柱子的方法是目前最先进的方法，但是也 是技术含量最高的方法。这个方法采用裂解液 （不含苯酚，氯仿）直接裂解， RNA/DNA 同时过柱子，然后在柱子上面直接分离RNA/DNA ，所以，这种方法 的优点第一在于，避免了使用trizol 在多糖多酚下不能成功分离RNA/DNA 的弊 端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因为其技术先进，所以难度很 高，国内厂家包括进口公司有两个技术难点一直没有突破。第一，裂解液的成分 必须针对去除多糖多酚进行研发添加去多糖多酚，代谢产物成分。否则会同样碰 到多糖多酚干扰提取的问题。第二、和TRIzol 原理不同，直接过柱法DNA/RNA 同时加到吸附柱上去。如何去除DNA 是第一个难点。否则会残留大量DNA 。两 个技术难点的没有掌握导致了国内公司包括的第二种试剂盒失败。国外公司因为 没有掌握第一难点，裂解液里面没有去除多糖多酚成分，所以包括 Qiagen 的 RNeasy plant mini kit 盒子也常常不能成功提取较复杂植物RNA 样品如黑加仑、 冬青等植物样品。 北京艾德莱生物的研发人员经过 3 年的不断研发改良，针对多糖多酚植物的特 点，和这两种试剂盒失败的原因，开发出了世界领先水平的RN09 EASYspin 植 物RNA 快速提取试剂盒，第一：采用直接过柱子方法，彻底抛弃了TRIzol 苯酚， 氯仿原理方法，使用无毒原料，并且添加了有自主知识产权的去除多糖多酚成分 解决了多糖多酚和代谢产物对于RNA 的破坏和干扰分离。第二：突破了直接过 柱子的方法DNA 去除的技术难点，解决了DNA 残留过多问题。经过实践过程 中，几十种国内外试剂盒包括Qiagen