影响ELISA试验效果常见问题-中国试验动物信息网.PDFVIP

影响 ELISA试验效果常见问题原因分析及解决办法  ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的 各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。 我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启 发，提高试验质量。 操作步骤 可能原因 解决办法 选择试 选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将 剂 试剂在室温下平衡 30­60 分钟。 1.血清或血浆标本分离不好即 1.标本为血清：最好将血液先自 进行加样；  然 存 放  1­2  小 时 后 ， 再 用  3000rmp 离心 15 分钟；标本为 2.手工操作中，加样板过多造成 血浆： 必须使用含抗凝剂的血液 加样后放入孵箱前等待时间过 标本收集管， 采血后必须立即颠 长(特别是室内温度较高时)；  倒采血管混合 5­10 次，放置一 加 样  段时间后，3000rpm 离心 15 分 3.加完标本再加酶试剂时酶溅 钟；若在几天内检测，可放在  出孔外。  2­8℃冰箱中，若要贮存，则置 于­20℃的低温冰箱内。  2.加样后及时放入孵箱。  3.加酶试剂后用吸水纸在酶标 板表面轻拭吸干。  4.如果采用 AT 或其他全自动加 样，最好选择 FAME 或其他后 处理仪器加酶试剂。  5.标本较多时，请分批操作。 1.孵育时未贴封片或加盖，使标 1.贴封片或加盖；  本或稀释液蒸发，吸附于孔壁， 孵 育  难于清洗彻底；  2.按说明步骤严格控制操作时 间。  2.孵育时间人为延长，导致非特 异性结合紧附于反应孔周围， 难 以清洗彻底。  1.采用手工洗板,孔与孔之间液 1.保证洗液注满各孔，洗板针畅 体交叉。  通，洗完板后最好在吸水纸 （选 择干净、无或少尘的吸水材料） 2.采用半自动洗板机洗板时，洗  洗