三种钩虫成虫幼虫虫卵及十二指肠钩虫童虫的扫描电镜-四川动物.PDF

四川动物 Sichuan Journal of Zoology 1988 7(1) 三种钩虫成虫、幼虫、虫卵及十二指肠 钩虫童虫的扫描电镜观察 黄 先 翔 尹 光 跃 (四川省医学科学院寄生虫病防治研究所) 近年来，国内外虽已有不少用电镜观察十二指肠钩虫、美洲钩虫、犬钩虫及其幼虫、虫 卵的形态生物学特征的报导，但扫描所用标本均系驱虫后检获的虫体，每有不同程度的损 伤，不利于观察虫体的组织结构。1986年我们应用体外培养技术，首次将活体的十二指肠钩 虫、美洲钩虫及犬钩虫的成虫、幼虫、虫卵及十二指肠钩虫童虫，进行了扫描电镜观察。结 果如下： 材料和方法 标本来源及处理：收集单一种钩虫感染者的粪便，按常规培养、分离感染期幼虫，分别 感染幼犬。感染后14天，将犬肠中检获的十二指肠钩虫童虫，以50％犬血清的RPMl1640培 养液培养1月，获得发育成熟的十二指肠钩虫成虫。美洲钩虫成虫系人工感染幼犬S0天后， 从犬肠内检获。犬钩虫从成犬肠壁收集。 上述虫体经体外培养数日后，分别用0.6％无菌盐水清洗三次，按常规收集虫卵，幼虫， 分别滴在Formvar膜上(聚乙烯醇缩甲醛所制)，使标本牢固地粘附。标本均用pH7.4磷酸 缓冲液洗涤三次，经2.5％戊二醛和1％锇酸分别作固定与后固定，以50～100％酒精—丙酮 脱水，异戊酯置换，CO2临界点干燥后镀金，用日立S-450型扫描电镜进行观察。 结果 (图见封三) 一、成虫形态 十二指肠钩虫成虫口孔呈卵圆形，宽大于长，在口囊腹面前缘有两对粗 大的钩齿，外侧齿较大，内侧齿略小，内齿的内侧基部有一个很小的副齿(图1)，口缘有 较厚的角质层环绕，在外缘腹侧面与钩齿相应处可见两对突隆的纵嵴及一对结节状乳突。虫 体表皮有较细密的皱纹，而环状条纹很深呈锯齿状，二条纹间距平均为2.2微米(1.8～2.4 微米) (图2)。雌虫尾部呈锥状，末端的尾刺清晰可见，长约23微米(图3)。雄虫交合 伞内缘上有多对乳突，交合刺长约57微米，末端尖细(图4)。14日龄的童虫较短小，形态与 成虫相似，口囊内两对钩齿已形成。虫体表皮较薄，横纹上有不规则纵纹，横状条纹较成虫 深且锯齿状明显，二条纹间距平均为1.3微米(1.2～1.4微米) (图5)。 美洲钩虫成虫的口孔几乎成圆形，口缘有较厚的角质层，口囊腹面前缘有一对半月状切 板，背面还有一对较小的切板(图6)。头端腹侧缘，有一对乳突明显可见，虫体表皮有较 多皱襞，环形条纹直而深，二条纹间距平均为2.6微米(2.5～2.8微米)(图7)。雌虫无 尾刺，雄虫交合伞内面有多对乳突，尤以交合伞腹面基部呈“品”字形的乳突最明显，其乳 峰甚为突出(图8)，乳突上有许多纵形细皱襞，并有规则的条纹向四周扩散。雄虫的交合 刺长约44.4微米，末端呈钩状(图9)。 9 犬钩虫成虫口孔宽大，口囊腹面前缘有三对粗大的钩齿，体表有不规则的皱襞，角皮横 纹较直，二条纹间距平均为3 . 6 微米( 3 ～4 . 2 微米) ( 图1 0 ) 。雌虫的尾刺长约1 8 . 8微米 (图11)。 二、感染期钩虫幼虫的形态 扫描三种钩虫幼虫的形态无明显区别，头部的顶端均为蜂 窝状结构( 图12)，尾端尖细，幼虫的环状皮纹排列整齐，而在虫体两侧从头至尾有一条明 显的侧线( 纵带) ，侧线的宽度及皮纹结构随虫种不同而异( 图13 、14 、15) ，十二指肠钩 虫、美洲钩虫及犬钩虫幼虫皮纹侧线宽分别为1.7、2.7 及2.5 微米；横纹间距分别为0.9 、 1.1及0.7微米。 三、钩虫卵的形态 用扫描电镜观察三种钩虫卵的形态与光镜下一致，均为卵圆形或近 球形，表面有一层很薄的膜状结构覆盖，有时可形成皱褶，或在卵壳上出现不规则的浅裂 纹，甚至在卵的一端显示明显的缺蚀，其卵的形状象一个有口瓶( 图16)，此种结构是否是 受精虫卵中幼虫破壳而出后所形成的卵孔，有待进一步研究。 讨论 本文应用体外培养技术，首次对生活的十二指肠钩虫重虫、成虫、卵及幼虫作了扫描电 镜观察。童虫通过体外长时间的存活以至发育成熟，其基本形态特征与成虫相似，仅皮纹间 距上有所区别，证明我们从童虫至成虫的培养研究是成功的。至于它们各器官的超微