细胞培养 - PowerPoint Presentation.ppt

细胞培养部分计划 0，细胞培养准备工作 1，鸡胚原代细胞培养及观察，细胞计数。 2，两天后作细胞传代 细胞培养的优点 1.活细胞：能长时间、直接观察、研究 活细胞的形态、结构、生命活动 2.可控制：可控制-选择对象：均一性、重复性 可控制-调节条件：物理、化学、生物等因素可控制-利用方法： 采用各种研究技术、记录方法： 研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记, 记录：摄影照片、缩时电影 3.应用广： 对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类, 不同组织 4.较经济：提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象 细胞培养的缺点 人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同. 当细胞被置于体外培养后, 生活在缺乏动态平衡的环境中, 久了，必然发生变化. 1.与体内主要不同 相对孤立、相对单一 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节 和细胞相互间的影响 2.主要表现 失去原有组织结构和细胞形态 分化减弱或不显, 细胞趋向单一化； 3. 要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。 体外细胞培养物的生长类型 按生长方式分成黏附型和悬浮型两种 粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类，如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 细胞在体内、外的粘附方式存在差异 体内：粘附是全方位 ，立体的 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面 体外培养细胞的形态分类 根据形态大致的不同，主要分 上皮样 成纤维细胞样其它，不定型 上皮样细胞型 形态：类似体内的上皮细胞 ，扁平，不规则多角形，中有圆形核。 来源：表皮及其衍生物，乳腺： 外胚层 消化道，呼吸道上皮 内胚层 内皮 中胚层 上皮性肿瘤 与体内上皮区别：体内：单层扁平，单层立方，单层柱状，假复层柱状纤毛，变移，复层扁平。体外：一种，不再区分。 生长特点 易相连成片，铺石状 生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动 成纤维细胞样细胞 培养中形态与成纤维细胞类似的 形态：胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起， 中有卵圆形核。 来源：成纤维细胞， 平滑肌： 中胚层 生长特点 排列成放射状，漩涡状 并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而 单独行动 游离的单独的成纤维样细胞， 常有几个伸长的细胞突起 培养细胞的形态不稳定，条件改变，细胞形态可有变化。 血清 Hela 高血清 低血清 成纤维细胞样 上皮样细胞 pH Hela 太酸或太碱 标准pH 成纤维细胞样 上皮样细胞 细胞密度 3T3 低密度 高密度 成纤维细胞样 上皮样细胞 生长状态改变 悬浮或贴附 悬浮 贴附 圆形 成纤维或上皮样 转化与否 未转化 转化后 成纤维样 可成上皮样 悬浮生长型 概念 培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源 自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞 癌肿细胞也可能 特点 在悬浮中生长良好 细胞圆形，单个或小细胞团 优点  生存空间大，提供数量大 传代方便(不需消化) 易于收获 可获得稳定状态 缺点 观察不方便 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 细胞计数 用70%酒