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1.目的基因的获取途径 (1)直接分离:从自然界已有的物种中分离,如从基因文库中获取。 (2)人工合成目的基因: ①化学合成法:已知核苷酸序列的较小基因,直接利用DNA合成仪用化学方法合成,不需要模板。 ②逆转录法:以RNA为模板,在逆转录酶作用下人工合成。 ③利用PCR技术获取。 2.限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶与解旋酶的比较 种类 项目 限制酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 作用结果 形成黏性末端或平末端 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 形成单链DNA分子 1.下列关于生物工程中常见的几种酶的叙述,正确的是( ) A.DNA连接酶可把目的基因与载体的黏性末端的碱基黏 合,形成重组DNA B.限制性核酸内切酶将一个DNA分子片段切成两个片段 需消耗两分子的水 C.Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种 耐高温的DNA连接酶 D.纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体,便于 植物杂交育种 解析:选 DNA连接酶连接的是磷酸二酯键;DNA分子是双链,因此切割DNA分子产生两个片段时需要两分子的水;Taq酶是热稳定DNA聚合酶,是连接单个脱氧核苷酸的,而DNA连接酶连接的是两个DNA片段;植物杂交育种是借助有性生殖实现,纤维素酶和果胶酶处理植物细胞获得原生质体应用于细胞工程。 B 2.下面是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图, 请据图作答: (1)图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”:即______________________;______________________;______________________;______________________。 (2)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程?为什么? ______________________________________________。 (3)过程②必需的酶是________酶,过程③必需的酶是________酶。 (4)若A中共有a个碱基对,其中鸟嘌呤有b个,③④⑤过程连续进行4次,至少需提供胸腺嘧啶________个。 (5)在利用A、B获得C的过程中,必须用________切割A和B,使它们产生________,再加入________,才可形成C。 (6)为使过程⑧更易进行,可用________(药剂)处理D。 解析:图中①过程是从细胞中获取相应的mRNA,由于基因的选择性表达,人的皮肤细胞中的胰岛素基因不转录,因此不能形成胰岛素mRNA。从mRNA→DNA是逆转录的过程,需要逆转录酶。DNA分子的扩增需用解旋酶将双链DNA解旋为单链。一个DNA分子中的鸟嘌呤(b个)和胸腺嘧啶之和占碱基总数(2a个)的一半,所以一个DNA分子片段中胸腺嘧啶数为(a-b)个。连续复制4次,共产生DNA分子24=16个,由于复制方式为半保留复制,故需要提供的胸腺嘧啶数量为(a-b)×(16-1)=15(a-b)。构建基因表达载体时需将目的基因与载体用同一种限制酶切割,产生相同的黏性末端,才可以在DNA连接酶的作用下连接形成基因表达载体。将目的基因导入细菌,常用Ca2+处理细菌细胞,使其变为感受态细胞,可吸收含目的基因的载体进入细菌的细胞内。 答案:(1)获取目的基因 构建基因表达载体 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 (2)不能。人的皮肤细胞中的胰岛素基因未表达(或未转录),不能形成胰岛素mRNA (3)逆转录 解旋 (4)15(a-b) (5)同一种限制性核酸内切酶 相同的黏性末端 DNA连接酶 (6)CaCl2溶液(或Ca2+) [例2] 下列关于转基因植物的叙述,正确的是 ( ) A.转入到油菜的抗除草剂基因,可能通过花粉传入环境中 B.转入抗虫基因的植物,不会导致昆虫群体抗性基因频率增加 C.我国对基因工程的态度是:不赞成、不允许、不支持、不接受任何基因工程实验 D.如转基因植物的外源基因来源于自然界,则不存在安全性问题 生物技术的安全性和伦理问题 [解析] A项中,抗除草剂基因导入到油菜的染色体后可以通过花粉传入环境中;B项中,转入抗虫基因的植物可杀死无抗性昆虫,对昆虫的抗性具有选择作用,所以会导致昆虫群体抗性基因频率增加;C项中,我国对生殖性克隆人的态度是:不赞成、不允许、不支持、不接
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