社区获得性肺炎不典型致病PPT.ppt

社区获得性肺炎非典型致病原流行病学调查解放军总医院 王 睿; 对于社区获得性肺炎的致病原的研究是一个全世界比较关注的问题。近年来，随着对非典型致病原（肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌）分离鉴定水平的提高，其在下呼吸道感染中的地位逐渐被人们所认识。我国关于非典型致病原所致社区获得性肺炎的研究很少，为了解非典型致病原感染现状，我们参加了亚洲地区多中心社区获得性肺炎流行病学调查。; 资料和方法 病例入选标准 住院或门诊病人，年龄大于18岁；X线胸片有新的浸润或实变，并且不能用其他原因解释；病人同时必须有下列症状或体征至少3项：（1）咳嗽、咳嗽加重或无痰干咳；（2）痰性质的突然改变；（3）体温38℃或36.1℃或在近24小时内有明确的发热  或体温过低；（4）肺部听诊有罗音或其他肺实变证据；（5）白细胞增加；（6）全身不适、肌肉痛或胃肠道症状; 病例排除标准有结核病史或结核证据；医院获得性肺炎；肺癌；吸入性肺炎；支气管扩张；就诊前2周内曾住院的患者；HIV阳性患者；使用免疫抑制剂患者。; 临床资料病例收集： 收集2001年11月至2002年3月解放军总医院、北京大学第三医院、北京友谊医院、海军总医院社区获得性肺炎患者共52例。 年龄18?86岁，平均年龄43.75?21.5岁 男性29例，女性23例。标本采集： 取患者急性期及恢复期静脉血标本、 急性期尿标本、 痰标本（无痰者留取咽拭子），共有痰标本49个，咽拭子标本3个。; 标本采集方法与处理1 血清学标本： 抽取静脉血按常规方法分离血清，间隔2-4周再采血一次，与第一次标本同时进行血清学检测。2 PCR标本： 取患者痰标本200?l加入含1ml 10:1 TE缓冲液（pH8.0）的小离心管中；咽拭子标本用1.0ml上述缓冲液浸泡棉签，经反复挤压后弃掉棉签。二者皆震荡30秒后，-20℃保存至DNA提取。3 尿液标本： 尿液用???菌容器留取，取1.5ml -20℃保存。; 肺炎衣原体：应用美国Focus公司生产的衣原体微量免疫荧光（MIF）试剂盒检测血清IgG、IgA抗体。 阳性标准：根据病期的变化，间隔2-4周采集的2次标本的血清IgG或IgA抗体滴度呈现4倍或4倍以上升高或减低，或IgG抗体滴度持续?1：512。;PCR方法 应用PCR方法扩增病原体特异基因，之后行琼脂糖凝胶电泳，紫外灯观察电泳条带，确定PCR产物大小。引物：肺炎支原体：选用针对P1粘附蛋白基因的一对引物，序列为：正向引物：5’-GCCACCCTCGGGGGCAGTCAG-3’；反向引物：5’-GAGTCGGGATTCCCCGCGGAGG-3’。肺炎衣原体：选用扩增目标是16SrRNA的一对引物，序列为：正向引物：5’-TGACAACTGTAGAAATACAGC-3’；反向引物：5’-CGCCTCTCTCCTATAAAT-3’; DNA模板的制备以及PCR扩增 取200?l上述标本储存液，13，000rpm离心30分钟，收集标本，去上清后加50?l裂解液55℃水浴1小时，煮沸15分钟，放于4℃，作为DNA模板备用。若PCR扩增中有抑制剂存在，则用酚-氯仿抽提DNA。 PCR扩增加用UNG预处理，消除既往DNA扩增所致污染；若应用内参照检测标本中有抑制剂存在，则应用标准的酚-氯仿方法抽提DNA，再次扩增。; 琼脂糖电泳 制备1.5%的琼脂糖，加8?lPCR扩增产物，在5V/cm电压下电泳45分钟后观察结果。P1基因扩增阳性片段大小为209bp，16SrRNA基因扩增阳性片段大小为463bp。 3、尿抗原检测 应用德国Biotest公司生产的酶联免疫检测（EIA）方法检测尿中嗜肺军团菌可溶性血清型抗原。阳性标准：OD值cut-off值，尿中存在军团菌抗原，考虑现在或过去有军团菌感染。; 结 果 52例患者中有24例诊断为肺炎支原体感染，阳性率为46.2%，其中支原体血清抗体和PCR检测皆阳性20例，确诊阳性率为38.5%；3例患者PCR阳性而血清抗体阴性，1例患者血清抗体阳性而PCR阴性，可疑阳性率为7.7%，  2例患者诊断为嗜肺军团菌感染，阳性率为3.8%。3例患者诊断为肺炎衣原体感染，阳性率为5.8%。 3例患者存在合并感染，2