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Khorana等人提出其理论
PCR理論 1970 Khorana等人提出其理論 DNA尚不能定序 寡核苷酸合成不易 1983 Kary Mullis等人提出實際操作方法 獲得1993年諾貝爾化學獎 進行PCR所需的材料與過程 熱穩定DNA聚合酶(Thermostable DNA polymerase) Taq- Thermus aquaticus 合成DNA片段長度有限 無校正功能(proofreading) Pfu- Pyrococcus furiosis 引子(primers) 人工合成的寡核苷酸 (18 ~ 32 鹼基) 三磷酸去氧核苷酸(Deoxynucleoside Triphosphates，簡稱dNTPs) 模版DNA (template DNA) 取樣時避免污染 PCR的原理與方法一 變性(Denaturation) 加熱（95℃）將模版DNA雙股分開 引子黏合(primer annealing) 降低溫度使特異性引子黏合至單股模版DNA的互補序列 （溫度40 ～ 72℃） 延展(extension) DNA聚合酶開始合成新股DNA （最佳反應溫度72℃） 此三步驟為一個循環，一般進行25 ～30個循環 PCR技術的應用領域 促使分子生物技術的突飛猛進主因之一 限制酶、載體、接合酶 + 目標DNA（已知序列基因以PCR放大） 古生物研究 遺骸中抽取DNA定序，例如：阿爾卑斯山5300前的冰人奧茲現代後裔的追蹤 (影片: iceman.mpg) 長毛象、琥珀中的昆蟲、蚊子 親緣鑑定或刑事鑑定 遺傳疾病診斷 病原微生物臨床分子生物學鑑定 親緣鑑定或刑事鑑定 限制片長度多形性分析(RFLPs) (Restriction Fragment Length Polymorphisms) 用限制酶切DNA，因DNA序列不同， 切出的長短不同 變異性重複序列VNTR: variable number of tandem repeat。一小段DNA前後重複多次，不同個體間某染色體上所具重複次數不同。 STRPs ， simple tandem repeat polymorphisms簡單前後重複多型性 SSLPs: short sequence length polymorphisms 短序列長度多型性 * PCR的原理與方法二 (王姿文等, 2003) PCR的原理與方法三 (王姿文等, 2003) PCR的原理與方法四 (王姿文等, 2003) *
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