单基因遗传性疾病的分子诊断PPT演示课件.pptVIP

. 限制酶切片段电泳后，经Southern Blot检测 1.35 kb 1.15 kb 0.2 kb . （三）地中海贫血的分子诊断 地中海贫血又称海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血，是一组遗传性溶血性贫血疾病。由于遗传的基因缺陷致使血红蛋白中一种或一种以上珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状态。 本病广泛分布于世界许多地区，东南亚即为高发区之一。我国广东、广西、四川多见，长江以南各省区有散发病例，北方则少见。 . 根据所缺乏的珠蛋白链种类及缺乏程度予以命名和分类。分为α型、β型、δβ型和δ型4种，其中以β和α地中海贫血较为常见。 . α 地中海贫血：大多数是由于α珠蛋白基因的缺失所致，少数由基因点突变造成。 各种表型的α地中海贫血的基因型 表型 基因型 正常人 αα/αα 静止型α地中海贫血 α—/αα 标准型α地中海贫血 — —/αα Hb H病（β4） α—/— — Hb Bart’s（胎儿水肿综合症，γ4） — —/— — ζ ψζ ψα2 ψα1 α2 α1 θ1 . 基因突变：缺失为主 遗传方式： 不完全显性遗传 ？ - -/αα　- -/αα - -/- - . α 地中海贫血的基因诊断 BamHI BamHI α2 α1 α2 10 kb 14 kb probe α基因簇限制性酶切片段和分子杂交探针 . 限制酶切片段电泳后，经Southern Blot检测 14kb 10kb aa/aa aa/a- aa/- - a-/- - - -/- - . β地中海贫血 ：主要是由于基因的点突变，少数为基因缺失。 LCR ε Gγ Aγ ψβ1 δ β IVS-I IVS-II β基因簇和β基因的结构 . 基因缺失和有些点突变可致β链的生成完全受抑制，称为β0地贫； 有些点突变使β链的生成部分受抑制，则称为β+地贫。 . β地贫基因突变较多，迄今已发现的突变点达100多种，国内已发现28种。其中常见的突变有6种： ① β41-42（-TCTT )，约占45%； ② IVS-Ⅱ654 ( C → T )，约占24%； ③ β17 ( A → T )；约占14%； ④ TATA盒- 28 ( A →T )，约占9%； ⑤ β71-72（+A ), 约占2%； ⑥ β26( G → A )，即HbE26，约占2%。 . 突变类型 分子缺陷 人群 1．核苷酸取代 (1) β-28核苷酸A→C TATA区转录信号突变，β+ 中国人 (2) βIVS-1第1核苷酸G→A 拼接接头突变，导致RNA加工缺陷，β0 地中海地区人 (3) βIVS-1第5核苷酸G→C 共有顺序突变导致RNA加工缺陷，β+ 印第安人 (4) βIVS-2第654核苷酸C→T 内含子变化导致RNA加工缺陷，β0 中国人 (5) β第17密码子A→T 无义突变导致无功能RNA，β0 中国人 (6)Hb Knossos(β27丙→丝) 编码区突变导致RNA加工缺陷，β+ 地中海地区人 2．?? 核苷酸插入 β密码子71-72间插入1bp 移码突变导致无功能mRNA，β0 中国人 3．?? 核苷酸缺失 β密码子41／42(-4)缺失 移码突变导致无功能mRNA，β0 中国人 . 遗传方式：不完全显性遗传 β/β0　β/β0 β0/β0 . 在b珠蛋白基因第2内含子第654位核苷酸C→T突变（IVS-II-654 C→T ，简称b654），是中国人所特有的，而且是最常见的b地贫基因突变之一。 654* A B C mRNA(N) mRNA(M) IVS I IVS II 579 ↓ 73bp IVS I IVS II b-globin gene b654 mRNA的剪接模式 . β654基因突变的分子诊断－RT-PCR法诊断剪切异常 Normal β β Patient β β０　β０ β０ 254bp 181bp 轻型　　重型 . β654基因突变的分子诊断－PCR-ASO方法 杂交　　　　　　　　　　不杂交 不杂交　　　　　　　　　　杂交 　正常　杂合子轻型　重型 . 反向点杂交同时诊断β基因多个点突变 M1 M2 M3 M4 M5 M6 正常探针 突变探针 基因芯片技术 现在已经开发了多种诊断β地贫的芯片检测阅读系统，系统多采用国际先进的PCR体外扩增结合DNA芯片反向点杂交检测技术，可快速准确检测全血样本中β珠蛋白基因上多个基因位点的突变 . 二、杜氏肌营养不良症（DMD） 肌营养不良症由于遗传方式的不同大致可分为以下几类： X染色体隐性遗传的Duchenne型和良性的Becker型 常染色体显性遗传的面-肩-肱型 常染色体隐性遗传