金菊千里光洁美洗液抗阴道毛滴虫作用的体外试验.doc

金菊千里光洁美洗液抗阴道毛滴虫作用的体外试验 杨志林 许志灵 李姣丽 (浙江大学附属第二医院) 摘要对金菊千里光洁美洗液的抗阴道毛滴虫作用进行体外光，电镜理搴研究．结果表明阴道毛谪虫在 该药物作用下，虫体质胰疏梧，胞质内染粒的电子密度失去均匀状态．随之棱胰断裂。棱质饿聚井教出， 最后虫体崩解死亡．井与甲硝唑比较，探讨其作用浓度．耐问以殛作用毛． 关键词 阴道毛滴虫 (1990) 推荐甲硝唑为该病治疗的首选药物。 由于甲硝唑应用有许多禁忌，副作用较重，因此 探索更理想药物，剂型，尤其是中药，确为必要。 我们用成都中医药大学研制的金菊千里光洁美洗液作体外抗阴道毛滴虫作用的 光、电镜观察。并与甲硝唑比较，现将结果报道 如下． 1 材料和方法 1．1 虫株的采集和培养 采集急性滴虫性阴道炎患者(无既往治疗 史)的阴道分珏物，用肝浸汤培养基加小牛血清 分离，培养虫体．开始接种加 双抗 (青、链霉 紊)，经2～4次转种达无菌培养后。不加“双抗 传代培养，保种。待稳定生长后，供实验使用。 1．2 药物和药物试验的方法 1．2．1 药物金菊千里光洁美洗液为高效生物提取制剂．由成洛阳旺草生物技术开发有限公司生产提供．溶于3．5ml 培养液中，实验时按不同浓度加入。【卫生许可证号】：豫卫消证字【2012】第0006号 【执行标准】：Q/LWC001-2012 溶于2ml培养渣中，实验时按不同 浓度加入。 叶够 1．2．2 药物试验的方法设药物实验组和空 白对照组．药物实验组又金菊千里光洁美洗液和甲硝唑 组。实验用药物都用培养渣稀释。并经离心、沉 淀，取上清渣。按照药物作用浓度，加入培养液 中测试对阴遭毛滴虫的作甩．以利比较两者的 结果．甲硝唑组按文献资料的作用浓度“]，仅设 2mg／ml和4mg／ml二组．药物实验时从培养 48h的培养液底部吸取悬渣于离心管内。以 1 50Orpm离心10mln，吸出上清渣．加入等量的 培养液，清洗2～3次后浓集虫体，用血细胞计 数器对虫体计数后定量加入各试验管，每管加 入虫敬为4．5×10‘个／m1．采用多管分组同时 进行试验的方法，测定药物在不向浓度，作用时 问内对虫体的作用，获得定量，定性的试验结 果。 1．3 实验观察与结果判断 实验观察在室温20~24℃ 内进行．虫体注 入不同浓度药物培养管内，混匀．孵育时闻为 5、10、I 5、30、60mln，2h以及24h．有或无虫体 的培养普还进行转种培养，在24、4．8h观察，对 有虫悻生长的培养管进行虫体计数． 1．3．1 光镜观察混匀各管培养渣，按孵育时 间，分别吸取各管嚣渣于载玻片上，复上盖玻 片，在高倍镜下(物镜为×40)观察5O个虫体， 计算存活虫数。统一标准为“ ；有虫体(晒虫)为 “阳性”，无虫体为“阴性 ．有虫体又分。虫体团 缩不动，胞质呈颗粒状，胞膜破裂或虫体结构模 糊定为死虫“0 ；有1～10个活虫为4-}11～3O 个活虫为++i31～50个活虫为W。各试验管孵 育至24h．发现有虫体，以血ll1·噜计数嚣计数， 对未见虫体或仅有死虫的试目 营都转种于正常 培养液中培养48h，进一步判断虫体是否死亡。 对“死、活”虫体进行制片，染色、显徽摄影。 1．3 2 电镜样品制备和观察 以加入30mgtml泡腾片药物孵育60rain 后．离心成团，吸出上清液，经2．5 戌二醛固 定15rain．以pH7．4PBS液洗涤二次。再加1 饿酸固定2h．然后进行乙醇系列脱水，用国产 环氧树脂618包埋48h，作超薄切片，用醋酸铀 及柠檬酸铅作双染色，JEOL一100SX型透射电 镜在加速电压为8OKV观察结果并摄影 2 结 果 2．1 金菊千里光洁美洗液对阴道毛滴虫作用的光镜观 察结果正常虫体的形状多为梨形，少数可为 椭圆形，在光镜下运动活跃，可见不停挥动的前 围1 正常阴道毛滴虫滋荠体的形态(×lO00) 2．2 金菊千里光洁美洗液对阴道毛滴虫作用的电镜观 察结果 正常阴道毛滴虫滋养体电镜观察显示虫体 呈卵圆形，有质膜包绕，表面具阿米巴样突起， 鞭毛和体侧的波动膜，轴柱贯穿整个虫体(图 1)。5mgtml浓度的泡腾片对虫体的作用不明 显，虫体的形态和活动根似于对照组，但孵育 24h后，虫体的效量(2．8×10‘个tm1)较对照组 (3．5×10‘个tm1)稍少 10mg／ml浓度在孵育 60rain时，活虫减少，出现团缩、变圊的死虫。 24h后虫体消失，经转种培养未发现虫体 30mgtml浓度对虫体作用5min，就出现团缩变 性不动的虫体。鞭毛、轴柱消失；胞质呈颗粒状 胞核增大、疏松或崩裂成几块，胞膜不完整 2)，染色时不能着色等变化。2h后，虫体消失， 转种培养未查见虫体。50mg／ml和100mgtml 浓度分别在作用l5和5rain后，