毒性抗原基因的载体.ppt

获得质量优良、安全的产品，关键环节如下 1. 选择优良的菌种和毒种，并保持其稳定性； 2. 选用适当的培养繁殖细菌与病毒等微生物的方法，包括优良的培养基、合乎要求的最好是标准化的实验动物、禽胚及细胞； 3. 熟练掌握制品的生产工艺； 4. 准确掌握产品的检验方法和判定标准，严格按标准进行质量检定。 * 内毒素：是革兰阴性菌细胞壁的组成部分，是脂多糖（LPS）复合体 。内毒素组成随细菌属的不同而有差异。引起非特异性效应，如发热和血压突然下降。一般细菌死亡或分解时大量释放到宿主组织。能杀死这些细菌的抗生素可以造成毒素大量释放，使患者因血压急剧下降而死亡（内毒素性休克）。 外毒素：由一些革兰氏阳性菌和少量革兰阴性菌产生的毒性更强的物质。（1）大部分是多肽。加热、紫外线照射或化学物质（如甲醛）处理等可使之失活。（2）酶。溶血素，裂解红细胞，使铁离子释放，而铁离子是所有细胞包括微生物和宿主细胞生长必需的元素。（3）杀白细胞毒素，这些毒素具有损伤和破坏某些种类的白细胞。 许多外毒素经过某些化学物质（如甲醛）处理后失去活性但仍保留抗原性的外毒素称为类毒素。 * 细菌性灭活疫苗制造 灭活细菌疫苗通用制造程序 菌种的选择 菌液培养 灭活 配苗 浓缩 菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 细菌性灭活疫苗简称灭活菌苗，种类、苗型甚多， 但制造的基本程序差别不大。 一、细菌性灭活疫苗制造 基本流程 菌液 佐剂 + 乳 化 分装和保存 原料 配置 灭活菌液 灭活 一、细菌性灭活疫苗制造 （一）菌种与种子 1.菌种 制苗用菌种多数为毒力强、免疫原性优良的菌株，通常使用1-3个品系，均由中国药品生物制品检定所或中国兽药监察所传代、鉴定、冻干保存和供应。 各种用于制造菌苗的菌种应按规定定期复壮，并进行形态、培养特性、菌型、抗原性和免疫原性鉴定，合格菌种准许用于制苗。 2.种子培养 将经鉴定符合标准的菌种接种于菌苗生产规程中所规定的培养基进行增殖培养，经纯粹检查、活菌计数达到标准后即为种子液，用于菌苗生产。 种子液通常保存于2-8?C冷暗处，不得超过规程规定的使用期限。 菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 （二）菌液培养 大量生产的细菌培养方法甚多，既有手工式的，也有机械化或自动化的培养方式。 机械化或自动化的培养方式通称为反应缸培养法，可供选择的菌液培养法有：液体静置培养法、液体深层通气培养法、透析培养法及连续培养法等。 菌液培养也可采用固体培养法，该方法易获得高浓度的细菌悬液，易稀释成不同浓度，且含培养基的成分较少，所以比较适用于制备诊断用的抗原。 一、细菌性灭活疫苗制造 菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 （三）灭 活 灭活菌苗通常根据细菌的特性加入最有效的灭活剂，采取最适当的灭活条件进行，几种灭活菌苗的灭活方法如表所示。 表 几种灭活菌苗的灭活方法 一、细菌性灭活疫苗制造 菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 （四）浓 缩 为提高某些灭活菌苗的免疫力，在培养过程中采取提高菌数的基础上，再通过浓缩方法达到目的。 常用的浓缩方法：氧化铝胶吸附沉淀法 离心沉降法 羧甲基纤维沉淀法 以上方法可使菌液浓缩一倍以上。 此外，有些细菌在生长过程中产生分子量小的可溶性抗原（如猪丹毒杆菌产生的糖蛋白）也可经氢氧化铝吸附浓缩；将破伤风脱毒液按盐酸—食盐法处理，以作进一步精制成提纯破伤风类毒素。 一、细菌性灭活疫苗制造 菌种的选择 菌液培养 灭活 浓缩 配苗 （五）配苗与分装 由于灭活菌苗所用的佐剂不同，所以配苗方法也不相同。 氢氧化铝菌苗：可在加入甲醛灭活的同时，按比例加入氢氧化铝胶配制；也可在菌液经甲醛灭活后再按比例加入氢氧化铝胶配苗。 有的厂油佐剂菌苗的配制程序为：于灭菌的油乳剂135m110号白油、 11.4m1Span-85、3.6ml Tween80混合液中，在边搅拌下加入等量甲醛灭活菌液配制。 配苗和分装：应