病理生理学研究的设计思路.ppt

第 二 讲基础医学实验研究的设计思路 基础医学实验研究的一般步骤 选题 下面举例说明一个科研设计及研究过程 第一步：选题 选题的关键就是要找到一个值得研究或者是有意义的、在现实条件下又具有研究的可行性的问题。 以下以国内某大学病生教研室的抗休克研究过程为例对科研设计问题进行介绍 20世纪70年代末，该室确定他们所感兴趣的休克问题为今后的研究方向； 然而，面对浩如烟海的有关休克的文献，应该研究什么问题呢？ 关于选题 应该研究临床上经常遇到的而又有争论的一个具体问题，问题不能太大，否则无从下手，问题太大等于没有找到问题。 关于选题 糖皮质激素用于抗休克和抢救危重病人已有半个世纪的历史，说明有效 但到底是否该用及如何用临床上一直存在争论，说明人们对该激素抗休克的机制尚缺乏认识，只是凭临床经验。 关于选题 第二步：提出工作假说 血浆中激素的浓度或水平究竟是否升高？ 工作假说 第三步：设计合理的实验方案验证假说 （一）应激、休克时激素受体结合功能的变化 工作假说 （二）激素受体结合功能降低的病理学意义 结果验证了前面的工作假说 (一) 提出问题 (二) 形成假说 (三) 立出题目 题 目： 实验对象 处理因素 实验效应 二、制定实施方案 （一）实验对象 （二）处理因素： 1.数量、水平 2.因素的强度 譬如烫伤施加多高的温度？ 3.因素的标准化及施加方法的标准化 创伤性休克时的击打强度、频率及持续时间 （三）实验效应 1.实验方法 （1）先进性 尽量用高、精、尖、新的方法，使之 事物深入到本质中去，使感性和理论深刻化。 （2）灵敏性 方法应稳定、灵敏、可靠，保证结果准 确。 （3）标准化 包括：仪器、试剂、实验条件、指标 检测、观察时间等。 三、科研设计的三原则 随机 对照 重复 四、统计设计 完全随机设计 配对（伍）设计 其他 有关统计方法参见《卫生统计学》教科书，《机 能实验学》中第57~64页也有描述 * * 制定合理的实验方案 确定研究对象 确定疾病模型 确定观察指标 确定检测方法 确定统计方法 提出工作假说 正式实验 积累实验资料 预实验及 修改方案 分析实验结果 进行书面总结 关于选题 经过大家讨论，认为： 他们注意到： 要了解糖皮质激素抗休克的机制，必须知道休 克时激素它在体内的水平、信号的转导过程以及与 休克发生发展的关系。 这就是他们所选择的课题 提出工作假说就是根据选题、调查的 文献资料、自己研究工作的基础等，从理 论上预先提出自己对所选的这个问题的合 乎逻辑、比较科学的基本想法或推测。 休克病人血浆中激素的浓度或水平是否升高？ 文献调研： 20世纪50年代：血浆中激素的水平无法直接测定 而临床工作发现，危重病人血液中嗜酸性粒细胞 增多，认为病人发生了肾上腺皮质功能不全，因 而用激素抗休克治疗可以自圆其说。 20世纪60年代：血浆中激素的水平可以直接测定，此后大量文献表明休克或危重病人血浆中激素水平不仅不低，反而明显升高。 课题组进行预实验测定烧伤病人血浆中皮质醇的浓度 得到肯定结果，证实了危重病人血浆中 激素水平不仅不低，反而明显升高。 说明危重病人肾上腺皮质分泌功能是好的。 如果这样的病人需要补充激素进行治疗，提示病 人对激素的反应性降低了，在内分泌学上称为激素抵抗 ，于是课题组产生了“休克和危重病人发生了激素抵抗” 这样第一个想法。 这样一个想法是否合理呢？ 再进行文献调研 获得Moore等关于“反常性嗜酸性粒细胞增多”报告的佐证 再次提出自己的工作假说 休克和危重病人糖皮质激素的功能降低，导致糖皮质激素抵抗即受体水平上的肾上腺皮质功能不全，促进了休克的发生发展， 有了工作假说就要通过实验对其进行严 格的验证。为此首先需要设计一个科学合理 的实验方案，由浅入深地、分阶段地、循序 渐进地进行实验研究。 1.实验设计 （1）研究对象：先研究动物模型、如获得预想结果再研究休克和危重病人； 应激、休克的动物模型的复制：先从简单的烫伤大鼠开始，如获得预想结果再复制狗的各种休克模型； （2）激素受体的检测：用文献上大家通用的放射配体结合测定法。 2.建立实验方法 3.积累实验资料 4.分析实验结果 当时设计了两组实验以回答下面两个问题： 1.激素受体结合量减少是否可引起受体水平上的皮质功能不全？ 2.激素受体结合量减少是否可促进休克的发生发展？ （1）实验设计 给大鼠注射能阻断受体的RU486，将受体阻断50%或80%，对照组注射载体溶液，给两组分别注射LPS复制内毒素血症或都放血复制失血性休克，比较两组的病理变化、微循环和血浆炎症介