phac1phac2基因双价植物表达载体的构建及其转基因烟草的获得.pdfVIP

分子植物育种 ,2003 年 ,第 1 卷 ,第 1 期 ,第 58 —65 页 Molecular Plant Breeding ,2003 ,Vol1 ,No1 ,58 —65 　 研究报告 RESEARCH REPORT phaC 1 、phaC 2 基因双价植物表达载体的构建及其转基因烟草的获得 1 ,2 1 1 郑军荣 　周鹏 　洪葵 1 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室, 海口 , 571101 2 华南热带农业大学工学院 , 儋州 , 571737 通讯作者 , hongk @public. dzptt . hi. cn 摘要 利用聚合酶链式反应 ( PCR) 技术 , 从类产碱假单胞菌 YS1 ( Pseudomonas psuedoalcali genese YS1) 染色体 DNA 中扩增并克隆了调控短链与中链 PHA 生物合成的两个关键酶基因 : phaC 1 、phaC 2 基因。 同时利用套叠 PCR 技术对 phaC 1 基因进行了改造 , 经过基因拼接构建了植物表达载体 pC3C1 ( 嵌合 ) ( ) ( ) phaC 1 、pC3C2 嵌合 phaC 2 和pC3C1C2 嵌合 phaC 1 和phaC 2 双基因 。将构建好的嵌合 phaC 1 和 phaC 2 双基因的植物高效表达载体 pC3C1C2 , 用冻融法转入根癌土壤杆菌 ( A grobacterium t umef aciens EHA105) 并且通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草 ( N icotiana tobacum Hon ghuadajin yuan ) 。2 个月后获 得了一批卡那霉素抗性烟草植株 , 抗性植株大田生长表型正常 , 生长速度相对缓慢。抗性植株经过 PCR 、PCRSouthern 、Southern 检测初步确定有 32 %烟草稳定整合了 phaC 1 和 phaC 2 。用氯仿 - 次氯酸 钠直接从部分 Southern 检测阳性转化植株中抽提纯化得到 PHA , 在产物合成水平确证有 25 6 %的转基因 植株。 关键词 phaC 1 基因改造 , 双价植物表达载体 , 转基因烟草 , 聚 - 3 - 羟基脂肪酸脂 Construction of Two Gene Plant Expression Vector Harboring phaC 1 、 phaC 2 Genes and Obtainment of Transgenic Tobacco Zheng J unrong1 , 2 　Zhou Peng1 　Hong Kui1 1 State Key Biotechnology Lab for Tropical Crops , China Academy of Tropical Agriculture Science , Haikou , 571101 2 Engineering School , South China University of Tropical Agriculture , Danzhou , 571737 Corresponding author , hongk @public. dzptt . hi. cn ABSTRACT phaC 1 and phaC 2 , two key polyhydroxyalkanoates polymerase genes of PHA biosynthesis were amp