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国家结核病参比室 结核菌涂片检查 内 容 结核细菌学检查早期历史简介 痰检工作的目的和意义 结核菌的形态和结构 涂片操作程序 碱性复红 EQA痰检规程与原规程的比较 讨论 附件图例 结核细菌学检查早期历史简介 科赫 科赫在发现结核菌之前，他在细菌学领域已取得极大的成就。1876年他发表了家畜炭疽病的文章轰动当时的学术界。1877年他奠定了细菌学研究技术的基础：涂片制作及染色方法，平皿培养，悬滴检查法等。 科赫用他早期研究中发现病原菌的方法致力于结核病病原菌的发现。他注意到以往运用碱性反应液可在周围组织中获得染色清楚的病原菌。因此他决定选用美兰作染液，用俾士麦褐作背景，找到了结核菌。(兰色) 在一次偶然的机会，一张感染结核菌组织的玻片，滴上染液后，被遗忘在热火炉表面。结果科赫发现玻片中的结核菌着色鲜艳。从此在结核菌染色过程中，加热成为一项常规步骤。 1882年欧利希发现结核菌表现出抗酸性，并提出使用复红染色剂寻找结核菌。 1882－1883年萋尔对结核菌的染色法进行了改进。提出用石炭酸替代苯胺，使用石炭酸复红。同年，德国病理学家尼尔森建议用复红和硫酸替代龙胆紫和硝酸。这就是萋－尼氏抗酸菌染色法的由来。 痰检工作的目的和意义 可疑者 随访患者 传染性结核病的诊断指标 评价传染性结核病的化疗效果 为结核病流行病学指标服务，涂阳患病率、涂阳发病率 结核菌形态结构 光学显微镜下为细长稍弯曲，两端钝圆的杆菌 ，菌体长度多为1.5~3.5um。生长发育期间形成分支(分枝杆菌)。经萋尼氏染色后在显微镜蓝色背景下呈红色杆状。 萋尼氏染色镜下形态 细胞壁与抗酸性的相关性：1) 分枝菌酸：为结核菌菌体的重要成分，是抗酸性的物质基础2)细胞壁的完整性。3)受紫外线影响 痰标本直接涂片萋尼氏染色显微镜检查 标本的采集（1）－容器 螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒 痰盒图例(1) 初诊时留取标本数量 以三份标本的阳性检出例数作为100％，留取一份标本的阳性检出例数占全部阳性例数的80％，留取两份标本的阳性检出例数占全部阳性检出例数的95％。 The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network －－IUATLD 查痰次数的分布 留痰： 第一次就诊留一次即时痰，给就诊者两个痰盒，嘱咐其留夜间痰和晨痰，于第二天送检。 可能情况：病人留一份即时痰，第二天送检两份标本或者未送检 留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰量3~5毫升。干酪痰、血痰、黏液痰为合格的标本。唾液属不合格痰标本。  痰瓶上标明病人姓名，初诊门诊序号（或随访病人登记号）。 痰标本留取后，痰盒切勿倒置、严防痰液外溢，应立即送检。 进行细菌学检查时，应在登记本和检验报告单上注明标本性状。      直接涂片法步骤（1） 直接涂片法步骤（2） 涂片后的实验台：是否可接受？ 染色（1） 将玻片放置在染色架上，玻片间距保持10毫米以上的距离； 不得使用染色缸：1）难以加热 2）阳性涂片污染染色液 火焰固定（5秒钟将玻片过火4次） 滴加石炭酸复红染液，盖满玻片。 火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾。脱离火焰，保持5分钟。 加热染色的原理 1.分枝杆菌细胞壁含有丰富的脂质，加热会增加其流动性，增加与染色液结合的几率 2.加热促进分子运动，增加分枝菌酸与染色剂的碰撞的几率 染色(2) 脱色： 流水自玻片一端清缓冲洗染色液，沥去玻片上的水。滴加脱色液，保持1分钟。 显微镜检查操作（1） 显微镜检查操作（2） 显微镜检查 读片时，首先从痰膜的一端由左至右观察相邻的视野； 当玻片移动到痰膜的另一端时，纵向向下转换一个视野； 然后从右向左观察 显微镜下所见 镜检：在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其它细菌和细胞呈蓝色 涂片结果报告标准(萋－尼氏抗酸菌染色法)阴性 300 视野 0条报告菌数 300 视野 1～8条 阳性1＋ 100视野 3～9条 阳性2＋ 10视野 1～9条阳性3＋ 每视野