第七章 RNA转录.ppt

有些终止子的作用可被特异的因子所阻止，使酶得以越过终止子继续转录，称为通读（ readthrough） 能够引起抗终止作用的蛋白质称为抗终止因子（antitermination factors） (六）RNA生物合成的抑制剂 1、嘌呤和嘧啶类似物：人工合成的碱基类似物能够抑制和干扰核酸的合成。如 NH2 SH SH 作为代谢拮抗物抑制 合成酶类或直接掺到核酸 分子中，形成异常RNA 或DNA。 NH2 NH2 OH N F NH2 SH 2、DNA模板功能的抑制物：可以与DNA模板结合，抑制其复制和转录 （1）烷化剂：使DNA发生烷基化，发生在G-N7，A-N1、N3 N7 ；C-N1。易引起嘌呤的水解，在DNA上留下空隙干扰复制或转录；或引起碱基错配。 （2）放线菌素：放线菌素D与DNA形成非共价的复合物，抑制其模板功能（低浓度抑制转录，较高浓度抑制复制）。具有类似作用的还有色霉素A3 、橄榄霉素、光神霉素。 （3）嵌入染料：可插入双链DNA分子相邻的碱基对之间，一般具有芳香族发色团。溴化乙锭（EB）是一种高灵敏的荧光试剂，常用来检测DNA和RNA。与DNA结合后抑制其复制和转录。 3、RNA聚合酶抑制物 （1）利福霉素：抑制细菌RNA聚合酶活性。利福平可以高效抑制结核杆菌，杀死麻疯杆菌，在体外有抗病毒作用。 （2）利链霉素：与细菌RNA聚合酶?亚基结合，抑制转录过程中RNA链的延长反应。 （3）?-鹅膏蕈碱：抑制真核生物RNA聚合酶活性。 第 二节 RNA转录后的加工 一.原核生物RNA转录后的加工： ●原核生物和真核生物mRNA的不同： 原核生物mRNA 多顺反子 转录与翻译同步 mRNA不需加工 寿命短 真核生物mRNA 单顺反子 转录后需加工运至胞浆 再翻译 mRNA需加工 寿命较长 二.真核生物RNA转录后的加工： rDNA 内含子 基因间隔 18s 5.8s 28s 每个重复单位 45s 转录物 3种 rRNA前身 剪接 18srRNA 5.8s/28s rRNA （2）转录起始 RNA聚合酶全酶扫描解链区，找到起始点，然后结合第一个核苷三磷酸。加入的第一个核苷三磷酸常是GTP或ATP，很少是CTP，不用UTP。所形成的启动子、全酶和核苷三磷酸复合物称为三元起始复合物，第一个核苷三磷酸一旦掺入到转录起始点， σ亚基就会被释放脱离核心酶。 ?因子仅与起始 有关，RNA的合 成一旦开始， 便被释放 ? E -35 -10 pppG或pppA 5‘ 5‘ 3‘ 3‘ 模板链 （3）RNA链的延伸 DNA分子和酶分子发生构象的变化，核心酶与DNA结合比较松弛，可沿DNA模板移动，并按模板顺序选择下一个核苷酸，将核苷三磷酸加到生长的RNA链的3’-OH端，催化形成磷酸二酯键。转录延伸方向从5’ ?3’ RNA链的延伸 （4）转录终止 新合成的RNA分子中 典型的回文结构（发夹结构） TATA box启动子上预起始复合物装配 反应特点： 1）底物：NTP ，适当Mg2+、Mn2+ 2）模板指导 3）反应不需引物，直接在模板上合成RNA 4）合成方向5，→3，（RNA链的延长方向） (三) 启动子和转录因子 启动子（promoter）： 指RNA聚合酶识别，结合和开始转录的一段DNA序列。 转录起点 5/ 负（模） 3/ 上游（—） 下游（+） 3/ -1 +1 正（编） 5/ mRNA 互补于负链 通过核酸酶消化分离被蛋白质结合的DNA片段 由含?70RNA多聚酶全酶识别的典型大肠杆菌启动子 大肠杆菌中部分启动子上的