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现代动物生物化学 酶的动力学问题-1 一、酶分离纯化的基本流程 某种酶的纯化过程 SDS鉴定 二、米氏动力学 斜率 P v 0 t 酶促反应的速度曲线 随着酶催化的反应进行，反应速度会变慢，这是由于产 物的反馈作用、酶的热变性或副反应引起的。但是，在反 应起始不久，在酶促反应的速度曲线上通常可以看见一段 斜率不变，就是初速度v0 。 为了便于研究，在酶的动力学中常使用初速度的 （v ） 0 概念。 “中间产物学说”是研究酶的动力学的基本出发点 S+E ES P+E 中间产物 反应过程 S+E ES ES* EP P+E 过渡态 复合物 酶介入了反应过程。通过形成不稳定的过渡态中间 复合物，原本一步进行的反应分为两步进行，而两步反应 都只需较少的活化能，因此降低了整个反应的活化能。 底物S的浓度对单底物酶促反应的动力学的影响 在其他条件确定的情况下,在低底物浓度时, 反应速度 与底物浓度成正比，表现为一级反应。当底物浓度较高 时，v也随着[S]的增加而升高，但变得缓慢，表现为混 合级反应。当底物浓度达到足够大时，反应速度也达到 最大值 （V ），此时再增加底物浓度，反应速度不再 max 增加，表现为零级反应。 反应速度对于底物浓度的变化呈双曲线,称为米氏双 曲线，其数学表达式为米氏方程. 速度曲线 米氏双曲线 在推导底物浓度对于酶反应速度之间的数学关系 之前，假设： 1 pH、温度是最适的，酶的浓度是确定的 2 反应在起始阶段，逆反应可忽略不计 3 反应体系处在稳态 （steady state） 稳态前， 稳态， 形成ES ES的浓度不变 k +1 k +2 E + S ES E + P k -1 根据中间产物学说，在稳态时，ES 的生成速度 与其分解速度相等。有以下关系式： v1 v-1+v+2 (1) k+1 [E] [S] = k-1 [ES] + k+2 [ES] = [ES] （k-1 + k+2 ） [E] [S] = [ES] （k-1 + k+2 ）/ k+1 (2) 令 （k-1 +