临床微生物学弧菌和弯曲菌PPT.ppt

厌氧性细菌及检验 临床微生物教研室 袁小澎 一定义 有氧条件下不能生长，无氧条件(不是绝对）下才可以生长的一类细菌 1836年Pasteur提出 临床上日益受到重视，60%临床标本存在厌氧菌感染---------------------需要重视 二 分类 1 有芽孢厌氧性细菌 一个梭菌属包括83个种 2 无芽孢厌氧性细菌 40多个菌属，300多个菌 种和亚种 三 感染 分布 原因 临床症状 厌氧菌在正常人体内的分布 厌氧菌 皮肤 上呼吸道 口腔 肠道 尿道 阴道 一芽孢菌 G+杆菌 梭状芽孢杆菌属 二无芽孢菌 （一）G+的杆菌 双歧杆菌 （二） G-的杆菌 类杆菌属 （三）G+的球菌 消化球菌属 （四）G-的球菌 韦荣氏菌属 0 0 0 + 0 0 0 + + + ± + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + ± 0 + ± ± ± ± + ++ + 致病的原因 1 组织缺氧或氧化还原电势降低 穿刺伤等封闭性伤口，血管压迫，肿 瘤压迫等等 2 机体免疫力低下 临床的症状 1 感染部位产生大量气体，组织脓肿和坏 死，皮下有捻发音，是产气夹膜梭菌感 染的特征 2分泌物有恶臭，或为暗红色，分泌物涂 片经革兰氏染色，发现细菌，而培养阴 性的 3 其它等等 厌氧菌标本的采集和送检 标本的采集和送检------------ 1 标本决不能被正常菌群污染； 2 应尽量避免空气 标本的采集 标本来源 收集的方法 封闭性脓肿 妇女生殖道 下呼吸道分泌物 胸腔 窦道，子宫腔，深部创伤 组织 尿道 针管抽取 后穹隆穿刺抽取 肺穿刺术 胸腔穿刺术 静脉注射的塑料导管穿入 无菌外科切开 上阴部膀胱穿刺 标本的送运与处理 针筒送运法 无菌小瓶送运法 棉拭送运法 大量标本送运法 组织块送运法 厌氧袋送运法 分离和鉴定 检验的方法 1 直接镜检 一些特殊的特点，临床工作中的总结 可对初步判断及临床应用做早一步的 指 导作用 2 分离培养 1 初步培养 1 ）培养基的选择 强化血琼脂平板 卡那万古霉素冻溶血琼脂平板 七叶苷胆汁平板等等 （三）检验方法及鉴定1．直接镜检： 1）动力观察：采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴片，观察细菌动力，可见流星或穿梭状动力的细菌。 2）制动试验： 标本， 霍乱多价诊断血清（效价1：64），用暗视野镜观察，3分钟内运动被抑制的即为阳性， 此法优点是快速而特异操作简便，但必须有数量较多的弧菌才检出。 3）涂片染色： 　　革兰氏染色阴性 　　并成鱼群状排列的弧菌。 2．快速诊断： 1） 免疫荧光菌球法：将标本接种于含有霍乱弧菌荧光抗体的碱性蛋白胨水中，经37℃4～6h，如有霍乱弧菌，在荧光显微镜下可见发荧光的菌球。本法适用于做大量标本的初筛。 2） SPA协同凝集试验：以霍乱弧菌IgG型抗体与SPA阳性葡萄球菌结合作为试剂，与米泔水样便或增菌液作玻片凝集，立即出现明显凝集者（＋＋＋）为阳性。 3．细菌分离培养1） 直接分离培养： 分离用的培养基有强、弱2种选择培养基。 弱选择培养基：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。 强选择培养基：常用的有庆大霉素琼脂、4号琼脂和TCBS琼脂等。 现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行分离。 4． 鉴定： 根据霍乱弧菌在各种选择培养基上的特点，挑选可疑菌落进行鉴定。鉴定以血清学（玻片凝集）为主，结合形态学、生化反应作出判断。 1） 玻片凝集试验：从分离培养基上挑取可疑菌落于霍乱弧菌多价诊断血清作玻片凝集试验。诊断血清应稀释成1:32-1:64的效价使用，立即出现凝集者为阳性，同时设生理盐水和阳性细菌株对照。 2） 形态学检查：取纯培养物涂片革兰氏染色，观察菌体形态及染色性。用悬滴法或半固体穿刺法检测动力。 3） 生化反应：霍乱弧菌氧化酶试验、靛基质试验、粘丝试验和霍乱红试验均阳性。 ①粘丝试验：用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将0.5％去氧胆酸钠水溶液于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，1min内悬液由混变清，并变得粘稠，以接种环挑取时可