VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及其对细胞增殖、黏附及侵袭的影响PPT.pptx

VEGF-C在宫颈癌细胞中的表达及其对细胞增殖、黏附及侵袭的影响;研究背景; 肿瘤淋巴转移是一个多步骤、多因素参与的及其复杂的过程。近来随着特异性淋巴内皮标记的发现，淋巴转移的研究成为继血管生成之后肿瘤研究的又一热点，以期通过阻断肿瘤的淋巴转移，改善患者的预后。 目前对于肿瘤淋巴转移机制的研究,主要集中在VEGF-C特异性与受体VEGFR-3 结合，诱导淋巴管生成，促进肿瘤的淋巴转移方面。 ; 血管内皮生长因子-C (vascular endothelial growth growth factor-C,VEGF-C)是新近发现的VEGF家族的新成员，是特异性淋巴管生长因子。在近50％的人类恶性肿瘤中表达。 VEGFR-3一种酪氨酸激酶受体，主要表达于正常组织的淋巴管内皮、新生的血管内皮及人的肿瘤细胞。 ;（M.A.A Al-Rawi.et al. Histology and Histopathology 2005）;实验方法;材料;;;;实验仪器 ; VEGF-C反义寡核苷酸的设计;设计反义链： 5’-GCC AGC CTC CTT TCC TTA GC-3’；正义链：5’-GCT AAG GAA AGG AGG CTG GC-3’，为提高对核酶的抗性，在两条链的两端各3个碱基硫代修饰。 确定序列后，常规进行人类基因组同源性分析，即：通过Blast分析，证实两条链与人类其他以已知基因无同源性。 为便于观察寡核苷酸转入细胞的效率，在反义链5‘端标记了羧基荧光素(FAM)，FAM的激发波长是480nm，发射波长是520nm，在荧光显微镜下是绿色的。 ; MTT法检测Hela细胞黏附能力的变化; 细胞体外侵袭力测定 ;三、统计学处理;结 果;图1 VEGF-C在宫颈癌Hela细胞中的表达 LsAB法 ×400 ;2、寡核苷酸转染后VEGF-CmRNA的变化;;;;3. 寡核苷酸转染后VEGF-C蛋白的变化;;24h;4. 寡核苷酸转染后对Hela细胞生长的影响;;5.寡核苷酸转染对细胞黏附能力的影响;;;6. 寡核苷酸转染细胞侵袭能力的影响;;图11 Hela细胞穿膜48小时 HE×400 ;讨 论;1．VEGF-C在Hela细胞中的表达 ;2. VEGF-C反义寡核苷酸转染后对细胞 内VEGF-C的影响;2.1 VEGF-C反义寡核苷酸对细胞的VEGF-C mRNA 的影响;反义寡核苷酸对VEGF-C mRNA抑制作用的时效性，说明反义寡核苷酸在72h被代谢失活，对VEGF-C的抑制作用逐渐被解除。 反义寡核苷酸抑制VEGF-C mRNA的表达，可能是通过Crooke等研究的反义寡核苷酸的作用机制：① 反义寡??苷酸与DNA双螺旋形成三螺旋，从而阻止DNA的转录。② 反义寡核苷酸与核内不均一RNA(hnRNA）结合，使其不能正确的剪切，成熟mRNA不能形成。;2.2 VEGF-C反义寡核苷酸对细胞VEGF-C蛋白的影响;3. VEGF-C反义寡核苷酸对细胞增殖的影响;4. VEGF-C反义寡核苷酸对细胞黏附能力的影响 ;5．VEGF-C反义寡核苷酸对细胞侵袭力的影响 ;总 结; 研究表明：VEGF-C在宫颈癌细胞Hela高表达，通过对Hela细胞自身增殖、黏附、侵袭等生物学行为的影响及进而调控肿瘤的转移，这可能也是VEGF-C促进宫颈癌淋巴转移的机制之一，这一推论还有待体内实验进一步证实。本研究以期为通过抑制VEGF-C，靶向性阻断宫颈癌淋巴转移的可行性，提供实验依据。 ;The end Thank you!