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gfp 标记内生枯草芽孢杆菌y10及其在白菜体内的定植
生态学杂志ChineseJournalofEcology 2015，34(7)：2064—2070 GFP标记 内生枯草芽孢杆菌 Y10 及其在 白菜体 内的定殖 半 杜 芳。何鹏飞 吴毅歆 陈卓君 杨 静。何月秋 一 (云南农业大学植物保护学院，昆明650201； 微生物菌种筛选与应用国家地方联合工程研究中心，昆明650207； 云南 农业大学农学与生物技术学院，昆明650201) 摘 要 枯草芽孢杆菌Y10是具有防治根肿病的白菜 内生菌株。为研究其在 白菜体 内的 定殖规律，将不同来源的含绿色荧光蛋白(GFP)质粒导入Y10进行荧光标记，测定了荧光 标记菌 的质粒稳定性、生长 曲线及 室 内平板拮抗 活性。结果表 明，仅有 pHT01． P43GFPmut3a能在Y10中稳定地遗传，且对YIO的生长和病原真菌拮抗活性无不利影响。 盆栽防效试验结果显示，在不同的栽培基质中，Y10的标记菌株与野生型对 白菜根肿病防 效无显著差异。稀释涂板回收及共聚焦激光扫描显微观察都证实，接种9d后在 白菜的根、 茎及叶部组织均有标记菌株的定殖，且在44d内仍保持 10一10cfu-g组织。这些定殖 结果表明，Y10在 白菜体内具有 良好的定殖能力，且这种特性可能与其防治根肿病有关。 关键词 内生枯草芽孢杆菌；绿色荧光蛋 白；防治效果；质粒；遗传转化 中图分类号 $476．1 文献标识码 A 文章编号 1O00-4890(2015)7-2064-07 ColonizationofGFP-taggedendophyticBacillussubtilisY10in Chinesecabbage．DU Fang ． HEPeng—fei，WUYi—xi ，CHENZhuo-jun，‘YANGJing，HEYue．qiu” (FacultyofPlant Protection，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming650201，China：NationalandLocalJoint EngineeringResearchCenterforScreeningand ApplicationofMicrobialStrains，Kunming650207， China；。Facultyof Agronomyand Biotechnology，YunnanAgriculturalUniversity，Kunming 650201，China)．ChineseJournalofEcology，2015，34(7)：2064-2070． Abstract：EndophyticBacillussubtilisY10isolatedfrom Chinesecabbage(Brassicarapa)can controleffectivelycruciferousvegetableclubrootdisease．Tounderstanditsclubroot—controlmech— anisms，GFP plasmidsweretransformedintoY10cellsforfluorescence·taggingbynaturaltrans- formation．Theplasmid stability，growth curveandplateantagonism bio—assay ofGFP-tagged strainsweredetemr ined，and theresultsshowedonlyplasmidpHTO1一P43GFPmut3acouldbe maintainedstablyanditsintroduction had nosignificantnegativeinfluenceonYIOgrowth and antagonisticperfomr ance．Potbio—assay
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