广西地方标准《白花丹中白花丹醌含量的测定 高效液相色谱法》编制说明.docVIP

广西地方标准《白花丹中白花丹醌含量的测定 高效液相色谱法》（征求意见稿）编制说明 （桂质监函[2013]187号文）广西卫生厅重点课题（重2010110）的资助。 白花丹是双子叶植物蓝雪科植物白雪花（Plumbago zeylanica L）的干燥全草。为多民族医常用药材，民间应用广泛，收载于1996年版的《广西中药材标准》第二册、广西壮族自治区壮药质量标准第一卷（2008年版）和1988年版国家卫生部部颁维药标准。在广西壮族及瑶族聚居区主要用来通调龙路火路，祛风毒，散瘀止痛。用于发旺（风湿骨痛），林得叮相（跌打损伤），心头痛（胃痛），肝脾肿大，额哈（毒蛇咬伤），痂（癣），乳癖[1]。 白花丹的根、茎、叶、花均有入药使用。含多种有效成分，如白花丹醌，β-谷甾醇，香草酸，白花丹酸等，其中主要成分是白花丹醌（C11H8O3），它的活性主要是抗白血病、抗癌(肝癌)、抗菌、祛痰、对心血管也有一定的作用[2]。 编制过程 3.1药材采集、基源鉴定 本品为白花丹科植物白花丹Plumbago zeylanica L.的干燥全草。全年可采，干燥。 本品主根呈细长圆柱形，长可达30cm，直径约5mm，略弯曲，表面灰褐色或棕红色。茎圆柱形，直径2～6mm，表面淡褐色或黄绿色，具细纵棱，节明显；质硬，易折断，断面皮部呈纤维状，淡棕黄色，中间髓部淡黄白色或白色，质松。叶片皱缩、破碎，多已脱落，完整叶片展平后呈卵形或卵状长圆形，长4～10cm，宽3～5cm，淡绿色或黄绿色。花序穗状，顶生或腋生，花序轴有腺体；萼管有腺毛；花冠淡黄棕色。气微，味辛辣。 药材标本采集地有广西境内南宁、上林、武鸣、博白、荔浦、金秀、龙胜、恭城、平乐、崇左、象州、乐业、以及巴基斯坦（购自新疆）共计13个产地17个批次，经广西药用植物园彭玉德鉴定为白花丹科植物白花丹（Plumbago zeylanica L.）的干燥全草。 多数文献报道，白花丹醌为白花丹中最重要的活性成分[3]。曾颖等[4]采用试管法做了白花丹素的试验，结果显示：1：500的浓度对流感杆菌、肠炎杆菌、脑膜炎双球菌有抑制作用；1：1000的浓度对肺炎双球菌有抑制作用；1：10000～30000的浓度对葡萄球菌有抑制作用。并且用白花丹素配成眼药水治疗沙眼患者，疗效显著，并且用白花丹素者治愈平均天数为3天，而用1％新霉素可地松眼药水治愈平均天数为7天，可见白花丹素治愈天数明显缩短。总有效率98.2%，与0.1％利福眼药水的疗效相似。通过本试验明确的显示了白花丹素有很强的抗菌活性。赵霞等[5]研究发现在高浓度(10-4 mol/L)的白花丹醌可抑制AA(花生四烯酸)的释放并完全抑制PMNL脂氧合酶(LO)的活性，进而抑制致炎的免疫刺激物白三烯B4(LTB )和廿碳烯酸的产生，显示强烈的抗炎作用；中浓度(10-6-10-7rnol/L)则刺激AA的代谢，从而增强5-LO和12-LO产物的生成，产生致炎作用；低浓度(10-8～10-9mol/L)时显示，其刺激作用受到抑制，所有廿碳烯酸5一LO产物均明显降低。在此浓度时，白花丹醌选择作用于l5-LO，产生抗炎的15-HETE，能抑制5-LO及其产物的产生，白花丹醌在极低浓度时亦具有抗炎作用。因此，白花丹醌在浓度不同的情况下，肯定了AA代谢与非特异性免疫系统的密切联系，同时解释了其抗炎和致炎作用分别与所用剂量有关，进而显示了白花丹醌在血液中浓度的明显差异将导致体内AA代谢途径的改变。赵艳丽等[6]首次证实白花丹醌在2~15μmol/L浓度范围内，能够抑制急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4的增殖、诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期进程。朱芳等[7]研究发现：白花丹醌随着药物浓度增加(2、8、32、128μmol/L)和作用时间(24、48、72h)延长，对人肝癌细胞HepG2增殖有明显的抑制作用。刘超等[8]研究表明白花丹醌对人乳腺癌细胞mda-mb-23有较好的抑制生长作用。韦燕飞等[9]研究发现，不同浓度白花丹醌对瘦素刺激人肝星状细胞转化生长因子-β1表达的抑制作用(以中、高浓度16.8μmol/L最为明显)，从而抑制HSC—ECM的合成，发挥抗肝纤维化的作用。 经对比文献关于白花丹中白花丹醌的报道以及实验室研究，选用白花丹醌为白花丹的含量测定成分。 关于白花丹中白花丹醌含量测定方法已有相关文献报道，多采用高效液相色谱法测定其含量。因高效液相色谱法操作简便，方法准确、快捷，因此本标准采用高效液相法为测定方法。 3.3.1 最大吸收波长的确定 经实验摸索，通过紫外光谱仪在200-600nm波长区间扫描，确定白花丹醌在265nm和410nm处有吸收，其最大吸收波长为265nm，因而选用此265nm作为检测波长。 图1：白花丹醌紫外吸收光谱图 3.3.2 色谱