竹荪4个菌种酯酶与过氧化物酶同工酶的研究.PDFVIP

维普资讯 1 一I留 沈阳粒业 大学学报，23 Journal0f Shenyang 竹荪4个菌种酯酶与过氧化物 酶同工酶的研究 华秀英 邵元 馕振彪 孙海鹰 (； — — — 面 农业大学) 摘要 采舟聚jq烯雠晦凝崆垂直半l板电泳嵌，对斜_埘、液体和 俸培鼻的竹荪4十茁种造行了醅酶 过襄 ，}二物酶同工酶酶谱铡定 ．培果表明固体培养的酯酶、过氧化物酶同工酶酶活较强 ．酶谱较多：藏体培养的酯 笛 过氧化蜘酶同工酶酶活最差，酶谱最少 ．在测定的4十菌种 中以42号菌种酶括最强 酶谱摄多。生产 上竹荪鞭培时盥选甩5 强、酶谱最多的菌种- 关键词 竹茹；獭 寨丙烯酰睦凝胶垂直平板电诛；酯酵；过氧化物酶 中围分类号 S554．6Qs4e．329．83 早在50年代，同：亡酶的研究就已应用于植物晶种的鉴定工作，但对人工栽培研究的 珍贵食用菌——竹荪 (Dictyophora {nd“。idfa)品种阃同工酶的研究尚未见报道 。本研 究的 目的在于探测竹荪不同品种间的同工酶酶谱的类型差异，以及同一品种不同生长阶 段 酶谱差别和不同菌种于不同生 妊阶段同工酶酶谱自每表现，从而指导 目前竹荪栽培 1 材料和方法 1．1 供试菌种 北号菌种为辽宁省新宾县野生竹荪子实体上分离{42号菌种 引 自福 建省古田县； l112号菌种也引自福建省古 田县j1108号菌种引自湖北省 1．2 电泳样品的髑备 1 2．1 斜面培 养试材处理 将4个菌种分别接种于PDA斜面培养基上 培 养，待貅面长 ． 满后，刮取其辩面表面菌丝体，每克菌丝体加1mll号浸提液。 {c吾 1．2．2 液体培 养试材处理 将4个菌种接种于PDA液体培养基中，25℃下于摇床振荡培 养，待形成大量菌球后，取菌球，用无菌水冲洗3次，擦干 每克菌球加1mI1号浸提镀 1 2．3 固体培养试椅处理 将4个菌种分别接种于木屑加麦麸固体培养基上培养，待菌 ． 丝体长满后，取菌熊体。每克菌丝体分别~gi2＼2rM 1，2号浸提媛 。1号浸提 液配方为三 羟 甲基氨基 甲烷 (Tris) (缓血剂)2．423g，0．1N HCil0ml，蔗 糖34．23g，半胱氨 酸0．14538g，维生素C (抗坏m酸)0．211344g，用蒸馏水于200ml容 量 瓶 定容，装入 试_剂瓶 l2号浸提液配方 (TBE)为0．1M Tris2．423g，O．1M H3BOs1．2355g，01M E])下A 4148g，，}1蒸馏水定容于200ml寄最瓶 ． 寅稿 口剁 2091—03～ 0 维普资讯 l84 沈 阳 枉 业 大 学 学 报 23卷 上述 备试材，在加入浸提液后放八冰箱 (一l1℃)冷冻 24h，然后职 出冷冻研磨 ， 冷冻离心 (~O00r／min，20mirO ，取上清液分装玻璃瓶保存于冰箱 中待测。 t．3 同工鼍 电泳测定 I．3．1 电泳条件 醇晦稻遵氧化物晦博王酶蜜碰均采甩垂直 平皈 聚丙蜡酰胺凝胶电 泳，分离胶浓度为7．5％，浓缩腌-浓度为3％，电极缓冲~ffsTris--Gly缓冲液 (pH值 8．9)，电压6o～120~，电流 m投，电棘1哜}．持在韫瘦4℃条件下l2～14h，用微量进样器 进样，进样量为50ml。 1．3．2 染 色固定 酯酶同工酶 以HKC--~--萘酯、HAC—日～萘酯为 底 物，采用坚牢 兰染色法 ，于37℃温度下染色30min左右，酶带颜色为红棕 色；过氧化物酶 同工酶染 色 采用醋酸联苯胺法，酶带颜色是深兰色。 1．3．3 结果记录 酶谱凝