细胞的制片与观测和细胞大小的测量.pptVIP

* * 实验二 细胞的制片与观察和 细胞大小的测量 实验目的 1.学习动物细胞标本的涂片制作法和了解动物细胞的基本结构。 2.学习并掌握测量细胞大小的基本方法。 （一）材料 人口腔粘膜细胞、大鼠。 （二）用品 显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、无菌牙签、解剖器具、染色缸、染色架、载玻片、盏玻片、滴管、吸水纸。 0.9％生理盐水、0.1mol／L碘液、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液、蒸馏水、自来水。 实验材料和器材 细胞的形态观察 细胞的显微测量 实验内容 第一部分 细胞的制片与形态结构观察 扁平细胞——人类口腔上皮细胞 柱状细胞——小鼠小肠上皮细胞 星形细胞——牛脊髓神经细胞 梭形细胞——小鼠平滑肌细胞 圆形细胞——人血图片(示红细胞) 小鼠肝细胞切片观察 人口腔上皮细胞制备(临时制片) 取口腔上皮细胞 盖上盖玻片 0.1%中性红染液 观 察 取干净载玻片 滴入0.9%NaCl溶液 人口腔上皮细胞 扁平上皮细胞 扁平上皮细胞 蟾蜍扁平上皮细胞(HE染色) 柱状上皮细胞 蝾螈小肠切片 (HE染色) 星状细胞 离体培养的新生老鼠脊髓神经细胞(HE染色) 平滑肌细胞 小鼠平滑肌细胞 小鼠肝细胞切片 小鼠肝细胞内DNA的显示(Feulgen反应) 圆形细胞 人血涂片 (Giemsa染色) (红色箭头示白细胞，兰色箭头示红细胞) 细胞大小的测量需要以目镜测微尺来进行，但其分度值随着放大倍数的变化而变化，长度也不一样，因此需要事先进行标定。而镜台测微尺的长度是已知的，目镜测微尺的标定是通过镜台测微尺来进行的。 第二部分 细胞大小的测量 0.01mm 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 5 6 7 8 目镜测微尺 (长度随放大倍数发生改变) 镜台测微尺 (每一大刻度值为0.1mm，小刻度值为0.01mm) 目镜测微尺与镜台测微尺 标定镜台测微尺 大鼠肝细胞大小的测量 细胞的显微测量 放镜台测微尺于载物台 调节使镜台测微尺与目镜测微尺平行 取下镜台测微尺 *装入目镜测微尺 记录二者在重合线之间的刻度 计算标定值 目镜测微尺的标定 如在低倍镜下重合线之间目镜测微尺的长度为50格 镜台测微尺的长度为68格 则： 50:68=1:x x=1.36格，即目镜测微尺的1小格相当于镜台测微尺的1.36格，而镜台测微尺每1小格的长度为10um，则目镜测微尺每1小格的长度为13.6um。 标定时应注意的问题 标定时必须严格按照操作规程，以免损坏测微尺； 重合线的判断应在二者刻度线完全重合； 比例式的计算； 标定值只能在同一放大倍数下进行测量。 细胞体积、核体积和核质比的计算公式： 椭圆形 V=4/3(a、b为长、短半径) 圆球形 V=4/3 (R为半径) 核质比 NP=Vn/Vc-Vn(Vn为核的体积，Vc为细胞的体积) *