枸杞脱毒苗的you导及光合特性的分析研究.pdfVIP

20O1年8月 四川大学学报 (自然科学版) Aug．2001 第38卷第4期 Journalof$ichuanUniversity(NaturalScienceEdition) V01．38 No．4 文章编号：0490．6756(2001)04—0550—04 枸 杞脱毒苗的诱导及光合特性的分析研究 曹有龙 ，唐琳 ，颜钫 ，罗青 ，郭宏玲。，陈放 (1．四川大学生命科学学院，成都610064；2宁夏农林科学院．银川 750001；3宁夏林业厅，银川750003) 摘要：利用茎尖分生组织(02～04mm)培养和花药培养，获得了枸杞脱毒苗．茎尖培养脱毒率在727％ - 875％之间，花药培养脱毒率在70．0％～765％间．进行3813下热处理茎尖分生组织组培苗，可提高脱毒 效果 叶绿素含量和光合强度飒I定表明，脱毒苗与对照相比l叶绿素含量增加23-26．9％，光台强度增加 6，9 ～ 12 1％ 关键词：枸杞；脱病毒苗；组织培养；光合作用 中图分类号 ：Q945 文献标识码：A 枸杞(L3ciumbarabrurnL．)是重要的药用植物，也是宁夏的一大名优特产，种植历史悠久，枸杞繁殖主 要靠无性繁殖_】0J，由于这一繁殖特点，受到病毒侵染后，会世代传染 1994--1998年我们对宁夏枸杞种植地 区进行了定期专门调查发现，在每年春季和盛夏初期，枸杞树有许多病毒症状．经我们采集带毒标本送与浙 江大学生物技术所鉴定发现，侵染拘杞植株的病毒主要为烟草花叶病毒(sMv)，为了保存高产优质枸杞新 品种，我们对拘杞进行了茎尖培养和花药培养研究，获得了脱毒苗，并对脱毒苗进行了叶绿素含量及光合作 用测定，现报道如下． 1 材料和方法 1．1 材料 供试材料均采 白宁夏农林科学院拘杞研究所，品种分别为宁杞 l号、宁杞2号、大麻叶和黄果枸杞． 1．2 实验方法 l2．1 茎尖分生组织培养 取供试品种幼茎，流水冲洗后，用70％的酒精浸泡 30s，然后转人0．1％升汞溶 液中消毒 10rain在无菌条件下，剥取02--0．4mm的茎尖分生组织，接种到培养基MS+05mg／L6-BA上， 在22--25℃光照下培养，光照强度3000Ix，每天光照 16h． 1．2．2 花药培养 取供试品种4-5ram花蕾(花粉为单核靠边期)，流水冲洗后，置于4C冰箱中处理24～ 48h，消毒方法 同茎尖分生组织培养 在无菌条件下，剥取花药，接种到培养基 MS+2．0mg／L 6．BA+l0mg／INAA上诱导愈伤组织发生，培养条件同茎尖分生组织．当愈伤组织分化出不定芽后，将不定 芽转人快速繁殖培养基(Ms+05mg／L6-BA+0lmg／LNAA)中进行扩繁 1．2．3 热处理培养 将已分化出3--4片叶的茎尖分生组织，转接到MS+0．5mg／L6-BA+0．1mg／LNAA 的培养基中，置于38℃、光照强度 lO001x的恒温培养箱中培养28-30d，进行热处理脱毒培养 1．2．4 光合特性测定 用混合液法提取叶绿素，用Arnolq公式计算叶绿素含量 7J．改良半叶法测定光合作 用强度 12．5 病毒检测 大田采集的样本，经浙江大学生物技术所进行抗血清学检测和电镜观察，确定在植株体 内主要为烟草花叶病毒(SMV，见图版)，因此，对脱毒苗的检测，我们主要用对烟草花叶病毒敏感的病毒指 示植物：千日红(Gromphtel~aglo~sa)、洋酸浆(Physotisfranidana)、黄瓜(Cucumh)、苋色藜(Chenol~dium amaranticolor)、曼佗罗 (Daturastoamorllt2zt~)、叶烟 (Nkvtianagtutinosu)和普通烟 (Ni~vtiana cⅢ r)采用涂抹法鉴定脱毒效果，在 15-20C的温室中进行病毒检测，每待检株系接种3种指示植物，每株 系接种同一指示植物3-5株，每株指示植物接种2片小叶与接种后的45d内重复调查指示植物的带毒症状 收稿 日期：1999．08．27 第4期 曹有龙等：楠杞脱毒苗的诱导及光舍特性的分析研究 551 2 结果分析与讨论 2．1 茎尖分生组织培养 脱毒效果取种植田问呈不同退化程度的植株上