原生质体融合育种PPT.pptVIP

第一节 微生物原生质体育种; 微生物原生质体的特点： 对渗透压特别敏感 对诱变剂的诱变效应更敏感 失去对噬菌体的敏感性 不受感受态的影响;第一节 微生物原生质体育种;一、原生质体再生育种 ~： 微生物制备原生质体后直接再生， 从再生菌落中分离筛选变异株， 最终得到优良性状提高的正变菌株;原生质体再生育种正变率高于常规育种？ 制备和再生过程中相关因素 微生物组成和结构改变 一般选用对数期细胞制备原生质体 不需要加遗传标记;二、原生质体诱变育种 操作：物理诱变剂 化学诱变剂 特点：操作繁琐、技术要求高 再生时间长、容易染菌 P223 扩展青霉PF-868原生质体诱变 ;第一节 微生物原生质体育种;第一节 微生物原生质体育种;第二节 微生物原生质体融合育种;微生物原生质体融合育种的优点？ 1、大幅度提高亲本间重组频率 2、扩大重组的亲本范围 3、集中双亲本优良性状机会更大 ;第二节 微生物原生质体融合育种;* ;一、直接亲本及其遗传标记的选择 1.营养缺陷型、抗性标记、热致死 孢子颜色、菌落形态等 注意：多数营养缺陷型菌株会影响代谢产物的产量 2.常把一方灭活后再融合 3. 可用不同荧光标记直接亲本 ;3. 可用不同荧光标记直接亲本 ;二、原生质体制备与再生 制备过程：分离、收集、纯化、活性鉴定、保存 去壁方法：1.机械法2.非酶分离法3.酶法 酶法分离原生质体：参考图9.3 ;第二节 微生物原生质体融合育种;第二节 微生物原生质体融合育种;酶法分离原生质体的影响因素？ （3）菌体年龄 丝状真菌 菌丝体尖端细胞 放线菌 对数期到静止期 细菌 对数期 酵母菌 菌体同步化;酶法分离原生质体的影响因素？ （4）稳定剂 高渗溶液　 无机盐：NaCl、KCl、MgSO4、CaCl2 有机物：蔗糖、甘露醇、山梨醇 丝状真菌 无机盐 细菌 蔗糖、氯化钠 稳定剂常用浓度：0.3~1mol/L;（５）酶解前的预处理　　 　 加入某种物质，抑制或阻止细胞壁某种成分合成 酵母菌、丝状真菌 巯基乙醇 酵母菌 EDTA 放线菌 甘氨酸 细菌 亚适量青霉素;酶法分离原生质体的影响因素？ （６）酶系和酶的浓度　　　 细菌、放线菌 　　　溶菌酶 真菌　 　　 蜗牛酶 注意事项：;酶法分离原生质体的影响因素？ （７）酶的作用温度和ｐＨ值 　　酶的最适温度、菌株生长最适温度 （８）菌体密度;酶法分离原生质体的影响因素？ （９）酶解方式 使用培养皿分离效果好 分离时保持良好的通气条件、适当振荡 分离条件经试验可确定 如计算测定原生质体形成率;第七节 微生物原生质体融合育种;二、原生质体制备与再生 ２．原生质体的鉴定 （１）低渗爆破法 p233 （２）荧光染色法 荧光增白剂 荧光显微镜;二、原生质体制备与再生 ３．原生质体的收集和纯化 （１）过滤法　　　　　适于丝状微生物 （２）密度梯度离心法　 离心后，原生质体上浮 （３）界面法　离心后，原生质体在界面 （４）漂浮法　　适于细胞较大的微生物;二、原生质体制备与再生 ４．原生质体的活力测定 （１）荧光素双醋酸盐染色法 （２）酚藏花红染色法 （３）伊文思蓝染色法;二、原生质体制备与再生 ５．原生质体的保存 　　液氮冷藏 加入保护剂，如：二甲亚砜、甘油等;二、原生质体制备与再生 原生质体的再生： 在高渗再生培养基上，原生质体重新 合成细胞壁，恢复成完整细胞。 参见p234 图9.4;1.原生质体再生的影响因素（ｐ234） 菌体生理状态 稳定剂 酶浓度和作用时间 再生培养基组成 残存菌体的分离 ； 再生培养基上冷凝水 原生质体密度、再生方法;二、原生质体制备与再生　 ２．再生率及其计算 p236 目的：找出最佳的原生质体制备 和再生条