10组织培养第十章　常见植物脱毒与快繁PPT.ppt

第十章 常见植物脱毒与快繁技术宜职院08.9 ;目的与要求 了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术，根据地方特点和组培技术现状，例举部分植物进行讲授，并结合学生查阅资料共同探讨。 具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术，具备马铃薯、草莓等植脱毒技术，进行微型薯生产基本知能，有利用图书及网络资源收集相关资料，了解相关行业信息的能力，并具备一定交流探讨能力。; 第一节 农作物的脱毒与快繁 植物组织培养技术已广泛运用于农作物育种和良种繁育，尤其是许多无性繁殖类农作物脱毒及良种快繁，对提高农作物生产的产量和品质发挥了极其重要的作用。;一、马铃薯的脱毒和快繁（一）茎尖培养脱毒1、取材 生产大田顶芽，或块茎，预培养抽生的枝条污染较少。供试材料存在病毒可结合热处理脱毒。2、消毒 自来水冲洗1h，70%酒精30s，10%漂白粉溶液5～10min，无菌水冲洗2～3次。 3、接种 解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。 4、培养条件 MS、Miller，25±2℃， 1000lx，4周后增至2000～3000 lx，光照16h。5、病毒鉴定 目测法和指示植物鉴定法。;;;二、甘薯的脱毒与快繁;3、病毒检测 目测法和指示植物鉴定法。 （二）脱毒苗扩繁和种薯的生产 通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。30d左右长成有6～8片展开叶的试管苗。待试管苗繁殖到一定数量后，即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。所结小薯即为原原种薯。以原原种（苗）为种植材料，在防虫条件下的无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯（良种）。 ;红薯原原种炼苗;;第二节 果树脱毒快繁;一、草莓 （一）草莓离体快繁技术 1、外植体 6～7月份匍匐茎15～20cm长时取材。 2、培养基 初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA 0.2mg/L 增殖MS+6-BA0.5～1.0mg/L。 3、生根和驯化 1/2MS+IBA0.2～1.0mg/L 根2～3cm时炼苗，一周后发新根，四周后可移栽。;（二）花药培养脱毒;草莓小叶嫁接法;二、柑橘; ;柑橘花药培养示意图;2、无病毒苗的繁殖 经无病毒苗鉴定后选出无病毒良种苗木，可建立原种母本园。在隔离区，按无病苗的栽培要求建成无病良种母本园，供繁殖无病苗木采穗用。;三、香蕉 （一）花序轴切片培养 1、花序轴切片 香蕉果穗已完全抽出时采上部末结实花序，无菌下剥取苞片除去子房。取顶端10～15cm长的花序轴段，灭菌后横切成2～3cm厚的薄片，再纵切成数片。 2、培养过程 常用MS培养基，也可用SM或改良MS，继代也可用Knudson培养基。;香蕉雄花序外植体诱幼苗过程;（二）影响试管育苗的关键技术  芽的反复增殖是香蕉试管育苗的技术关键。芽的增殖效果如何，较重要的衡量指标是增殖率和代期（—次继代培养的时间），均与生长调节剂关系最为密切。细胞分裂素以6-BA 3～4mg／L为宜，增殖率可达到4以上，代期为3～4周，因而增殖效率高。; 第三节 蔬菜组织培养一、番茄1、花药培养⑴取花药3～7mm长、单核中期的花蕾。⑵将花蕾用0.1‰吐温40溶液浸泡5min—70％酒精15s—3％的漂白粉10 min—无菌水冲洗—接种⑶从花蕾中取出花药，接种在DBMII＋2.0mg/L NAA＋1.0mg/LKIN的培养基上，27℃、24h光照后黑暗下培养。;2、叶培养⑴取无菌幼嫩叶片，切成5×5mm的小块。⑵MS＋0.2mg/LIAA＋2mg/L BA 27℃、光。⑶25天后，愈伤组织分化芽。一个月后每切块长出2～5个芽。⑷芽转到无激素的MS培养基上，5～10d后形成根。 ;3、胚培养 ⑴外植体的制备　授粉后30～40d果实—95%乙醇消毒—5%NaCl中5min—无菌蒸馏水充分淋洗除去种子上的胶状复被。 ⑵培养基　MS附加硫胺素3.0um。pH6.0。附加2.4－D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈伤组织启动和保存培养基。 ⑶培养条件　愈伤组织启动和保存暗培，27℃。再生生根20～30℃、16h/d，荧光下进行;二、甘蓝 1、取材和处理 剥去叶球的叶片，留下中心柱和腋芽，—70%酒精1-2分钟—0.2%升汞10-15分钟—剥离腋芽—接种在繁芽培养基上（MS+IAA0.2-0.5mg/L+6BA1.0-3.0mg/L） 2、培养 ? 光照100