10-核苷酸代谢PPT.ppt

嘧啶核苷酸从头合成途径 c、UMP转变为CTP CTP CTP合成酶 ATP Gln H2O UMP UDP UTP a、嘧啶环上原子的来源 b、UMP的从头合成 嘧啶环上各原子的来源 天冬氨酸 CO2 NH3 N N C C C C 6 5 4 3 2 1 H2N-CO- P 氨甲酰磷酸 显著不同处：先合成嘧啶环,然后再和PRPP作用形成核苷酸。 相同处：都有从头合成途径和补救途径。 UMP CMP TMP 与嘌呤核苷酸合成的 嘧啶核苷酸的生物合成 第一阶段：合成氨甲酰磷酸 第二阶段: 嘧啶核的形成，包括反应2，3，4 第三阶段：形成尿苷酸, 包括反应5，6 1．尿苷酸（UMP）的合成 （1）从头合成途径（De novo synthesis） The pyrimidine biosynthetic pathway 尿嘧啶核苷酸合成途径 天冬氨酸 氨甲酰天冬氨酸 二氢乳清酸 乳清酸 乳清苷酸 尿嘧啶核苷酸 氨甲酰磷酸 尿苷磷酸化酶 Ura R-1-P Pi U（尿苷） 尿苷激酶 UMP ATP ADP 尿嘧啶磷酸核糖转移酶 Ura PRPP PPi （2）补救途径（salvage pathway） UMP CMP + NH3 2. 胞苷酸（CMP）的合成 第十一章 核酸的酶促降解和核苷酸代谢 本章讨论核酸酶的类别和特点，对核苷酸的生物合成和分解代谢作一般介绍。 第一节 核酸的酶促降解 第三节 核苷酸的合成代谢 第二节 核苷酸的分解代谢 第一节 核酸的酶促降解 核苷酸酶 核苷磷酸解酶 核酸 核苷酸 核苷 碱基+核糖-1-P 磷酸 核酸酶 核苷水解酶 碱基+核糖 脱氧核糖核酸酶(DNase) 核糖核酸酶(RNase) 非特异性核酸酶 核 酸 酶 1、核酸酶的分类 （1）根据对底物的 专一性分为 （2）根据切割位点分为 核酸内切酶 核酸外切酶 2、核酸酶的特异性 3、限制性内切酶 外切核酸酶对核酸的水解位点 5′ p p p p OH B p p p p 3′ B B B B B B B 牛脾磷酸二酯酶（ 5′端外切5得3） 蛇毒磷酸二酯酶（ 3′端外切3得5） 内切核酸酶对RNA的水解位点示意图 5′ p p p p OH Py Pu Py Py 1′ p p p G A C U p p p G A 3′ RNAase I RNAase I RNAase T1 RNAase T1 Pu ：嘌呤 Py：嘧啶 限制性内切酶类型 I型：分子量大于105，多亚基，需S-线苷蛋氨酸、ATP和Mg2+ ，识别位点与切割位点相差甚远，产物为异质，是限制与修饰相排斥的多功能酶. Ⅱ型：分子量小于105，需Mg2+ ，切割位点位于识别 位点上，产物为专一性片段，不具修饰酶功能。现在分子生物学研究所用的限制性内切酶均为此类。 ⅡI型：识别位点为5-7bp的非对称序列 ，切割位点在顺序之外离识别 序列5-10bp，切割双链，个别也切割单链。是限制与修饰相多功能酶. 限制性内切酶的命名 Eco R I 序号 属名 种名 株名 例：Eco R I，这是从大肠杆菌（Ecoli）R菌珠中分离出的一种限制性内切酶 Hind 例：流感Haemophilus influengae d （属名） （种名） （株系） I— 特异性甲基化酶 II—GTPyPuAC III— AAGCTT 限制性内切酶的意义 限制性内切酶是分析染色体结构、制作DNA限制图谱、进行DNA序列测定和基因分离、基因体外重组等研究中不可缺少的工具，是一把天赐的神刀，用来解剖纤细的DNA分子。 限制图的定义和构建 限制图（亦称物理图谱）是DNA的限制性内切酶酶解片断沿DNA分子的物理位置的排列顺序以及各片断的相对长度和绝对长度。由于限制性内切酶能在独特顺序切割双链DNA产生大的DNA片段，它们提供了一种以碱基对为单位距离给DNA分子作图的方法，在确定DNA分子一级结构的过程中，限制图的构建是一项必不可少的工作。 限制图制作方法示例：末端标记单酶切法 限制性内切酶解法 SV-40基因组限制性酶谱 SV-40病毒基因