胆管细胞癌活检组织T细胞的免疫组化检测与分析.docVIP

精品论文 参考文献 胆管细胞癌活检组织T细胞的免疫组化检测与分析 崔彬１　姜汉国２ １．广东省廉江市人民医院病理科　广东　廉江　５２４４００;２．广东医学院病理教研室　广东　东莞　５２３０００ 　　【摘要】　目的　探讨CD４＋CD２９＋辅助性T细胞在胆管癌发病机制的作用.方法　收集１６例胆管癌患者外周血及手术活检标本,采用流式细胞术检测外周血CD４＋CD２９＋T细胞及其胞内肿瘤坏死因子alpha;(TNF－alpha;)及gamma;干扰素(IFN－gamma;)的百分含量;收集１３例胆管炎患者作为对照.采用免疫组化SP法检测胆管组织内CD４及CD２９分子的表达含量,以及TNF－alpha;及IFN－gamma;的含量.结果　与对照组比较,胆管癌患者外周血CD４＋CD２９＋T细胞的百分含量明显升高(P＝０．０１６),但胞内TNF－alpha;及IFN－gamma;却无统计学差异(分别为P＝０．１１４及０．２２３).免疫组化显示胆管癌患者胆管组织内CD４、CD２９分子及TNF－alpha;表达含量均明显高于对照组(分别为P＝０．００２、０．００６及０．０２１),但IFN－gamma;含量却明显降低(P＝０．０１３).结论　CD４＋CD２９＋辅助性T 细胞及其胞内TNF－alpha;升高, 而IFN－gamma;降低,导致Th１/Th２平衡向Th１倾斜,可能是胆管癌的新型免疫机制. 【关键词】　胆管癌;　辅助性T细胞;　免疫组化;　流式细胞术【中图分类号】R３９２ 【文献标识码】B 　　【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０５９４－０１　　 　　胆管癌的发病机制尚未明确,目前已知其与免疫存在重要关系.研究表明,辅助性T细胞的异常,导致抗原提呈过度致使肿瘤微环境破坏,最终导致正常细胞的过度增值,是肿瘤的一个新机制[１].在辅助性T 细胞亚群当中,CD４＋CD２９＋T细胞是相对独特的,在部分肿瘤发病当中起到重要角色[２]. 但目前尚无研究探讨该细胞在胆管癌患者的表达及其意义,这对进一步阐明胆管癌的免疫机制是不利的.本研究从全身及肿瘤局部入手,探讨该细胞在胆管癌患者外周血及癌组织的表达情况,发现胆管癌患者该细胞数量增加,具体过程如下: 　　１　资料与方法 　　１．１　患者资料　选取２００５至２０１２年期间我院收治的胆管癌患者作为观察对象,入选条件如下:经手术切除标本,经HE染_______色确诊为胆管癌,近８周内未使用糖皮质激素或免疫抑制剂等,最后共入选１６例,男性１０例,女性６例,年龄(５６．７２plusmn;１３．４６)岁.选取同期行手术治疗的１３例胆管炎患者作为对照组,其中男性８例,女性５例.经检验,两组患者的性别构成及年龄均无统计学差异. 　　１．２　流式细胞术　清晨采集以上对象的静脉血约５ml,使用Beckmancoultercell多色流式细胞仪,分别检测CD４及CD２９双阳性的T 细胞所占的百分比, 从而代表CD４＋CD２９＋T细胞的数量.使用DMI６０００B荧光显微镜(Leica公司生产)观察并摄像,FITC 的激发波长为４８８nm,TRITc的激发波长为５６８nm,用于图像采集的显微镜物镜为４０倍油镜,数值孔径为１．３.CD４工作浓度１:５０,绿色荧光;CD２９工作浓度１:１００,红色荧光;DAPI核染,蓝色荧光,两者共表达则表现为黄色荧光,定位方面以细胞质为主.为定量分析两种胶质瘤细胞系中CD４及CD２９荧光强度,选择细胞较为密集的区域,每高倍视野随机选取２０个肿瘤细胞,利用Leicaconfocalsoftware软件分析荧光强度,分析荧光强度所占视野平均强度的百分率,并且重复观察３次,以相对平均荧光强度作为该蛋白的相对表达量(采用百分数表示). １．３　统计学处理 　　２ 　结果 　　２．１　外周血流式细胞术　与对照组比较,胆管癌患者外周血CD４＋ CD２９＋ T 细胞的百分含量明显升高(P＝０．０１６),但胞内TNF－alpha;及IFN－gamma;却无统计学差异(分别为P＝０．１１４及０．２２３,表１左侧,图A 及B). 　　２．２　免疫组化　本研究的１６例患者当中有１１例为高分化腺癌,HE染色见癌组织均在管壁内浸润生长,环绕整个管壁;浸润的癌组织呈大小不等,形状不规则的腺体结构,部分可扩大呈囊腔.低分化腺癌３例:镜下可见癌组织部分呈腺体结构,部分为不规则的实性片块,亦在管壁内弥漫浸润生长.经免疫组化检测,发现最具特异性的CD２９分子呈褐色,多表达于胆管壁.经t检验,发现胆管癌患者胆管组织内CD４、CD２９分子及TNF－alpha;表达含量均明显高于对照组(分别为P＝０．００２、０．００６ 及０．０２１),但IFN－gamma; 含量却明显降低(P＝０．０１３,). 　　 　　３　讨论