专题1基因工程” 和“专题2细胞工程-课件PPT.ppt

③PCR扩增技术与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 DNA复制(碱基互补配对) 原料 四种游离的脱氧核苷酸 条件 模板、ATP、酶、原料、引物 不同点 解旋 方式 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 场所 体外复制(PCR扩增仪) 主要在细胞核内 酶 热稳定的DNA聚合酶(Taq酶) 细胞内含有的DNA聚合酶 结果 在短时间内形成大量的DNA片段 形成整个DNA分子 (2)基因表达载体的构建——最核心步骤 ①基因表达载体的组成:启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。 注意：①与载体相比较,增加的启动子、目的基因和 终止子三个基因片段,其功能各不相同。 ②启动子(DNA片段)≠起始密码子(RNA);终止子 (DNA片段)≠终止密码子(RNA)。 ②基因表达载体的构建方法 提醒 该过程把三种工具(只有两种工具酶)全用 上了,是最核心、最关键的一步,在体外进行。 (3)将目的基因导入受体细胞 细胞 类型 常用 方法 受体 细胞 转化过程 植物 细胞 农杆菌 转化法 体细胞 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→ 转入农杆菌→导入植物细胞→整合 到受体细胞的DNA上 动物 细胞 显微注 射技术 受精卵 将含有目的基因的表达载体提纯→ 取卵→获得受精卵→显微注射→早 期胚胎培养→胚胎移植→发育成为 具有新性状的动物 微生 物细 胞 Ca2+处 理增大 细胞壁 通透性 原核 细胞 或酵 母菌 用Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组 表达载体DNA分子与感受态细胞混合 →感受态细胞吸收 ①基因工程唯一不涉及到碱基互补配对的操作步骤。 ②微生物做受体细胞主要是个体微小,代谢旺盛, 繁殖速度快,获得目的基因产物多。 ③植物细胞还可用基因枪法和花粉管通道法。 (4)目的基因的检测与鉴定 目的基因的检测与鉴定 检测步骤 目的 方法 原理 工具 现象 1 DNA分子杂交技术 碱基互补配对 放射性同位素作标记的含目的基因的DNA片段 杂交带 2 检测目的基因是否转录出了mRNA DNA分子杂交技术 碱基互补配对 放射性同位素作标记的含目的基因的DNA片段 杂交带 3 检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗原-抗体杂交 抗体的专一性 特定抗体 杂交带(阳性反应) 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因 例题： 1.下列有关基因工程技术的叙述,正确的是（ ） A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶 和载体 B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸 序列 C.选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌 繁殖快 D.只要目的基因进入受体细胞就能实现表达 C 2.利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所 需要的产品。下列选项中能说明目的基因完成了 在受体细胞中表达的是 （ ） A．棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B．大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA C．山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列 D．酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白 D 课 后 作 业 见附件 专题2 细 胞 工 程 植 物 细 胞 工 程 1、理解植物细胞的全能性 2、了解植物细胞脱分化和再分化的结果 3、掌握植物组织培养的特点 4、理解植物体细胞杂交和植物细胞培养的联系 5、掌握微型繁殖和植物组织培养的联系 6、掌握作物脱毒、人工种子的制备过程和意义 学 习 目 标 植物细胞工程 概念 原理：生物学原理和分子生物学原理 水平：细胞整体水平或细胞器水平 目的：改变细胞内的遗传物质，获得细胞产品 细胞的全能性：概念、原因、大小 植物组织培养 过程：外植体→愈伤组织→胚状体→植物体 脱分化：形成愈伤组织 再分化：植物细胞选择性表达，形成胚状体 特点：子代与亲代性状高度遗传 去细胞壁：纤维素酶、果胶酶 诱导剂：PEG 融合完成的标志：新细胞壁的形成 过程：原生质体融合+组织培养 植物体细胞杂交 知 识 网 络 一 植物组织培养及细胞全能性 1.操作流程及培养条件 (1)操作流程 (2)培养条件：营养物质(水、无机盐、蔗糖、氨 基酸和有机酸等)、激素(如细胞分裂素、生长素 等)及其他条件(无菌、适宜的温度和pH等)。 注意 ①幼嫩的组织脱分化较为容易,如茎尖、 根尖、形成层细胞易脱分化,而植物的茎、叶和成 熟的组织则较难。 ②对外植体要进行消毒处理,而对各种器械要彻底 灭菌。 ③植物组织培养中用到的有机碳源一般为蔗糖,用 葡萄糖也可以,但后者的成本高。 ④诱导愈伤