田基黄保肝活性部位研究.docVIP

精品论文 参考文献 田基黄保肝活性部位研究 于治国 陈天宇（安徽巢湖职业技术学院医学分院 238000） 【中图分类号】R28【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）14-0023-02 【摘要】目的 对田基黄保肝活性部位进行研究。方法 运用药效学方法寻找田基黄的保肝活性部位。用水、70%乙醇、90%乙醇分别提取药2次，每次1小时，对得到的提取物分别进行药效学试验。结果 结果表明水提取物能显著抑制CCl4所致的小鼠血清谷丙转氨酶活性升高。结论 药效学试验结果表明，水提取物用柱层析方法，65%乙醇洗脱液能具有最佳保肝活性。 【关键词】田基黄 保肝 活性部位 田基黄（Hypericum japonicum）系中国传统中药，始载于《生草药性备要》，是藤黄科金丝桃属植物，中医临床上常用于治疗肝炎、急性黄疸型肝炎。为确定田基黄保肝作用相对应的活性部位，用动物模型对其进行筛选研究。 1、田基黄保肝活性部位研究（一） 1.1 试验目的 观察不同溶媒提取药材得到的浸膏对小鼠实验性肝损伤的保护作用，筛选提取溶媒。 1.2 试验材料 药材为田基黄药材（购自安徽省亳州市药材市场，产地：江西，安徽省安泰医药生物技术有限责任公司余世春研究员鉴定为藤黄科金丝桃属植物田基黄Hypericum japonicum Thunb.ex Muarry）；动物为昆明种小鼠（体重18～22g，安徽省医学科学研究所提供）。试剂为水(自来水)、工业乙醇、四氯化碳（AR，北京化学试剂公司）、联苯双酯滴丸（浙江万邦药业股份有限公司）、谷丙转氨酶（ALT）试剂盒(赖氏法)（上海荣盛生物技术有限公司）、花生油（食用油）。752DG型分光光度计（上海光谱仪器有限公司），80-2全离心机（金坛市荣华仪器制造有限公司）。 1.3供试品溶液的制备 田基黄药材 Fig 供试品溶液的制备 1.4 实验内容 取昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组，每组10只，分别为对照组，四氯化碳模型组，水提取组、70%乙醇提取组、90%乙醇提取组，联苯双酯滴丸组（阳性组）。各给药组按0.2ml/10g/1d剂量灌胃给药1次，正常对照组及四氯化碳模型组给予同量的灭菌生理盐水，各组连续灌胃给药7天，于最末次给药1小时，除正常对照外，其余各组均腹腔注射0.1%四氯化碳花生油溶液0.1ml/10g，染毒24小时后，采用眼眶放血法采血，分离血清。血清中的丙氨酸氨基转移酶催化丙氨酸和alpha;-酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨酸，丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成2，4-二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，能被分光光度计测定吸光度（A）值，通过线性方程计算出丙氨酸氨基转移酶的活力。 1.5 绘制标准曲线 取5根血清管，分别标号：0、1、2、3、4，各管加入2，4-二硝基苯肼0.50ml，混匀，37℃水浴保温20分钟后，再分别加入0.40mol/L氢氧化钠溶液5.0ml，置室温10分钟，按下表分别加入试剂。 Tab.1 各管加入溶剂的顺序 以“0”号管校正“零”点，读取各管在波长505nm处吸光度值。 1.6 处理各组小鼠血清 对照管 取血清0.1ml，将丙氨酸氨基转移酶基质液于37℃水浴保温5min，分别取0.5ml放置于各血清管中，混匀，37℃水浴保温30min,分别加入2，4-二硝基苯肼0.5ml，混匀，再分别加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5.0ml，室温放置10min, 752DG型分光光度计检测在505nm处吸光度A，校正“零”点。 对照组、模型组、阳性组、水提取组、70%乙醇提取组、90%乙醇提取组分别取血，静置约5～10min,离心15分钟，离心速度3500r/min,定量移取血清0.1ml于10ml试管中（试管编号对应上取血液印管号）。将丙氨酸氨基转移酶基质液于37℃水浴保温5min，分别取0.5ml放置于各血清管中，混匀，37℃水浴保温30min,分别加入2，4-二硝基苯肼0.5ml，混匀，再分别加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5.0ml，室温放置10min, 752DG型分光光度计检测在505nm处吸光度A。 1.7 实验结果 根据线性方程，将上述吸光度数值换算为酶活力单位。 Tab.2 酶活力单位试验数据 1.8 实验结论