用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的探讨.docVIP

精品论文 参考文献 用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的探讨 黄显杨 （南宁市红十字会医院 广西南宁 530012） 【中图分类号】R512.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）08-0204-02 【摘要】 目的 通过实验研究找到用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认的方法，最大程度地避免漏检或误检。方法　将高浓度值血清标本作一系列的倍比稀释，同时用酶促化学发光法、ELISA法和金标法检验，研究发现三种方法的相关性，从中找出规律性。结果　酶促化学发光法检测线性范围较宽，但在0.15ng/ml附近易出现不确定检测结果，ELISA法检测线性范围稍窄，在0.30ng/ml浓度值以下易产生不确定检测结果，金标法检测灵敏度最低，在3.5ng/ml浓度值以下易产生不确定检测结果，更低的浓度则出现假阴性的结果。结论　根据酶促化学发光法定量检测值，可选择金标法、单孔ELISA法或选择用抗-HBs阳性血清进行中和确认乙肝表面抗原。 【关键词】 酶促化学发光法 ELISA法 金标法 复检 1 前言 化学发光免疫分析技术，将酶的化学发光与免疫反应结合起来，凭借其灵敏度高、线性范围宽、标记物的有效期长、无放射性危害、可实现全自动化等优点，在免疫分析领域得以迅速地发展起来。但在乙肝表面抗原检测实践中，我们不时发现了假阳性检测结果、检测重复性也不易于把握等问题，于是提出了用酶促化学发光法检测乙肝表面抗原阳性结果复检确认方法的研究课题。在实验室现有条件下，我们选择了ELISA法和金标法作为确认实验的观察方法。 2 材料与方法 2.1 试剂 酶促化学发光法试剂由郑州安图绿科生物工程有限公司提供，ELISA法试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供，金标法试剂为北京万泰生物药业股份有限公司提供。 2.2 仪器 Autobio e-LISA全自动样品处理系统，Thermo MULTISKAN MK3酶标仪，Autobio LUMO化学发光分析仪，Rayto RT-3000型全自动洗板机。 2.3 标本准备 找到上一日HBsAg检测为高浓度值的血清标本若干份备用；为了避免基质效应对实验系统的影响，找出上一日HBsAg、HBsAb检测同时为0值的血清标本若干份，制备成混合血清备用[1]；用0值混合血清作为稀释液，对HBsAg高浓度值血清标本逐一进行倍比稀释，制备成一系列的待检血清标本。 2.4 实验方法 取稀释后的系列标本同时用酶促化学发光法、ELISA法和金标法检测HBsAg，观察相同标本不同方法检测结果间的相关性，从中发现规律性，从而找到复检确认的方法。 3 结果 实验结果见下表。 三种方法检验结果对照 稀释度方法 1 2 3 CLIA法ng/ml ELISA法S/CO值 金标法 CLIA法ng/ml ELISA法S/CO值 金标法 CLIA法ng/ml ELISA法S/CO值 金标法 原液 100.9 29.51 + 153.6 29.63 + 132.2 29.54 + 1:1 48.97 29.16 + 76.66 29.27 + 65.99 29.18 + 1:2 23.05 28.98 + 37.10 29.08 + 31.94 28.99 + 1:4 11.43 28.71 + 17.88 26.39 + 15.40 26.31 + 1:8 4.86 21.43 + 8.83 20.44 + 7.61 20.38 + 1:16 1.99 13.64 plusmn; 4.13 14.18 + 3.56 14.14 + 1:32 0.79 6.35 - 2.02 7.71 plusmn; 1.74 7.68 plusmn; 1:64 0.31 2.73 - 0.96 3.65 - 0.82 3.64 - 1:128 0.13 1.18 - 0.47 1.69 - 0.40 1.59 - 1:256 0.07 0.56 - 0.19 0.74 - 0.18 1.31 - （备注：金标法“