地衣芽孢杆菌GXN151的纤维素酶基因cel12A的序列分析及其在大肠杆菌中的表达精选.pdfVIP

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2018-01-15 发布于贵州
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地衣芽孢杆菌GXN151的纤维素酶基因cel12A的序列分析及其在大肠杆菌中的表达精选.pdf

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地衣芽孢杆菌GXN151的纤维素酶基因cel12A的序列分析及其在大肠杆菌中的表达精选

第 22 卷　第 3 期广西农业生物科学 2003 年 9 月　 V ol22, N o 3 Journal of GuangxiA gric. and B iol. Science Sep t. , 2003　文章编号: 1008 3464 (2003) 03 0194 07 地衣芽孢杆菌 GXN151 的纤维素酶基因cel12A 的序列分析及其在大肠杆菌中的表达 1 2, 3 2, 3 2 2 刘永生 , 冯家勋 , 段承杰 , 赵广存 , 柏学亮 , 1 2, 3 2 张成刚 , 唐纪良 , 马庆生 ( 1　中国科学院沈阳应用生态研究所, 辽宁沈阳 110015; 2　广西大学分子遗传学研究所, 广西南宁 530005; 3　广西大学微生物及植物遗传工程教育部重点实验室, 广西南宁 530005) 摘要: 地衣芽孢杆菌菌株 151 的 12 基因为 783 , 可编码含 261 个氨基酸的羧甲基纤维素酶 GXN cel A bp 12 , 12 的末端第 1～ 28 氨基酸具典型的信号肽特征、第 9～ 31 氨基酸具跨膜功能域特征、第 104 Cel A Cel A N ～ 261 氨基酸形成家族 12 糖基水解酶 (glycosyl hydrolase) 功能域。将编码其第 73～ 261 氨基酸的DNA 序列克隆到大肠杆菌表达载体 30 (+ ) 得表达质粒 12 , 用 1 诱导处理 109 pET a pGXN A mmol L IPT G JM ( 3) 12 的培养液6 12 的表达量达到最高, 在 109 ( 3) 和 21 ( 3) 中 D E pGXN A h pGXN A JM D E BL D E pL ysS 该表达蛋白质可分别占菌体胞内总蛋白的 543% 和 20 9% 。在含羧甲基纤维素的LA 平板上 JM 109 ( 3) 12 和 21 ( 3) 12 表现有较弱的羧甲基纤维素酶活性, 说明重组的 12 D E pGXN A BL D E pL ysS pGXN A Cel A 的催化功能域具有独立的催化活性。包含体检测表明 12 在