蝽亚科部分族的分子系统学研究（半翅目：蝽科）研究.pdfVIP

摘 要 运用线粒体DNA中编码rRNA蛋白质的基因16SrRNA作为分子标记，选取半翅 目Hemiptera蛤科Pentatominae蜷亚科Pentatominae7族18属22个代表种，即:斑须 蜻Dolycorisbaccarum(Linnaeus)，尖角普蜷PriassusspinigerHaglund，斑莽蜷Placosternumurus StAl，麻皮蜷Erthesinafullo(Thunberg)，赤条蜷Graphosomarubrolineata(Westwood)，二星蜻 Stolliaguttiger(Thunberg)，玉蛤HoplistoderafergussoniDistant，角肩真蜡PentatomaangulataHsiao etCheng，褐真蜻PentatomaarmandiFallou，中纹真蛤PentatomadistinctaHsiaoetCheng,斑真 蜷PentatomamosaicusHsiaoetCheng，全蜻Homalogoniaobtuse(Walker)，小斑岱蜷Dalpada nodfieraWalker，宽碧蜷Palomenaviridissim(Poda)，菜蜷Eurydemadominulus(Scopoli),a肩辉 蜷CarbulasinicaHsiaoetCheng,辉蜻Carbula.oblusangulaReuter,拍蜻Plautia户mbriata (Fabricius)，稻绿蜻NezaraviridulaLinnaeus，宽胫格蜻CappaeatibialisHsiaoetCheng,卵圆蜻 Hippotadorsalis(StAl)和茶翅蜡HalyomorphaPicus(Fabricius)共27个个体对其亲缘关系进 行初步研究。通过特异引物扩增和基因测序的研究方法获得它们的线粒体DNA (mtDNA)的16SrRNA基因片段，并分析了其遗传多态性。在扩增的长为400bp的 基因片段中，去掉两端引物，通过排序，有350个碱基可用于这27个个体的比较。通 过测定分析该基因片段的序列发现，27个个体具有27种基因型，不同种群存在丰富的 DNA序列多态性，同一种的不同个体差异较小。DNA序列应用Clusta1X1.8,DnaSP, Bioedit5.09,MEGA软件进行排序、比较和分析，并计算核昔酸组成、多态性位点以 及遗传距离，用邻位相连法构建Neighbor一oining(NJ)系统进化树，从而确定各类群 之间的系统关系。通过分析得出以下结论: 1.在国内首次使用特异引物扩增蜷亚科昆虫的mtDNA-16SrRNA基因片段，通过 测序获得了蜻亚科7族 18属22种27个个体的基因序列片段。研究发现16SrRNA基 因片段适合于族、属之间亲缘关系的研究。 2无水乙醇浸制标本可应用于总DNA的提取、16SrRNA基因片段的特异引物扩 增、提纯和测序。 3.本实验中，标本DNA的轻微降解不影响实验结果。 4.在扩增的16SrRNA基因片段中，共检测到核营酸变异位点191个，占总序列 的54,57%，除去具缺失或插入的位点后，序列变异为42.57%eA,T,C,G的平均 含量为33.84%,43.24%,6.78%,16.14%,A+T的含量为77.08%,G+C的含量为22.92 %，这一结果与昆虫中A+T的含量高于G+C的含量这一结论是一致的。 5.以B“ootstrapTestofPhylogeny1000次重复作出各个分枝的置信度。形成的 Neighbor-Joining(NJ),MinimumEvolution(ME)和MaximumParsimony(MP)分子系统 树表明，NJ树的置信度最高。 6.以蜷亚科昆虫27个个体的16SrRNA基因序列构建的分子系统树显示:麻皮蜻 属与菜蜷属的遗传关系较近，二者位于进化树的底部，说明这两个种比其它类群起源 较早;绿蜷属和碧蜷属的亲缘关系比较近，二者又与玉蜷属互为姐妹群;条蜻属与斑 须蜷属互为姐妹群;二星蜻属与辉蜻属的亲缘关系较近，之后二者又与卵圆蜷属互为 姐妹群;蜻族的真蜷属与岱蜷属的关系比全蜷属的亲缘关系近，全蜷属与格蜷属互为 姐妹群。这与传统分类中属的关系有较大差异。 关键词:半翅目:蜡亚科;分子系统学;mtDNA;16SrRNA;多态性;亲缘关系 Abstrac