胞壁酰二肽抗CD10偶联物免疫导向治疗儿童急性B淋巴细胞性白血病的研讨.pdfVIP

摘要 第一部分胞壁酰二肽一抗CDl0偶联物制备及活性检测 目的靶向性治疗是一种潜在的有效抗白血病治疗方法，尤其在清除微小残留病、防 止肿瘤复发方面发挥重要作用。本文将CDIO单克隆抗体(anti-CDlOMAb)与胞壁 各自的生物活性。 MAb) 方法(1)姗P—Ab制备：采用化学合成方法将CDIO单克隆抗体(anti—CDIO S-100 与胞壁酰二肽(肋P)连接合成新的免疫偶联物(MDP-Ab)，硅胶柱及Sephacryl 及肋P—Ab)；氢离子质谱仪、电喷雾电离质谱仪与紫外分光光度计分析合成中各产 物的分子量(结果表达方式为姗+[H])及MDP-Ab中各分子比。以半胱氨酸标准曲 分离收集CDIO+急性淋巴细胞性白血病细胞(阳性率≥95％)，加入MDP-Ab共同孵育， 采用间接流式细胞术检测MDP—Ab与CDIO+细胞结合能力，以未偶联的抗CDIO抗体作 白血病患儿外周血单个核细胞，贴壁3h，悬浮细胞经尼龙膜柱筛选获得T淋巴细胞， 培养8天，收集各组树突状细胞(DC)，检测细胞免疫表型、内吞作用及细胞上清 液中自介素12(IL-12)水平。将丝裂霉素C处理过的DC与急性淋巴细胞性白血病 患儿同体的淋巴细胞按l：i0比例混合培养72h，CFSE染色法检测各组淋巴细胞增殖 情况，ELISA方法检测上清液IFN—Y水平。 一t 电喷雾电离质谱与紫外线吸光度结果显示免疫偶联物中MDP-Ab分子量约为IOIKD， (4) ㈣Y㈣2㈣0Ⅲ8眦8㈧∞ 吣7， (7)IFN— 高。 结论1、成功采用化学方法合成新免疫偶联物MDP—Ab ． 胞能力。 4、MI)P-Ab诱导的树突状细胞能促进同体淋巴细胞增殖，分泌高水平IFN—Y分 子，与细胞因子、脂多糖联合作用最强，提示MDP—Ab保持促进树突状细胞增殖及成 熟活性。 博士研究生王玲珍(儿科学) 指导教师孙立荣教授 关键词：胞壁酰二肽；抗CDIO单克隆抗体；白血病；儿童；化学合成 第二部胞壁酰二肽一抗CDl0偶联物诱导的树突状细胞体外激活淋 巴细胞抑制白血病细胞增殖的实验研究 目的探讨胞壁酰二肽一抗CDIO偶联物激活淋巴细胞的功能及其对裸鼠白血病移植 瘤的杀伤作用。 。 用反复冻融方法制备Nalm-6白血病细胞抗原，于DC诱导培养第4天加入且共同培 养，隔日换液，继续培养。第8天，收集各组DC。经Nalm-6抗原致敏、丝裂霉素C 处理过的DC与培养第7天的ALL患儿同体T淋巴细胞按l：i0比例混合培养48h， 法检测各组T淋巴细胞的杀伤活性。将36只4周龄的雄性BALB／C裸鼠皮下接种1 ×107个／0．2毫升Nalm-6白血病细胞，第7’10天可形成皮下结节的白血病裸鼠模 型，随机分为6组(每组6只)，移植瘤内分别接种上述各组淋巴细胞，每周1次， 共2次，于给药第14天处死裸鼠。观察各组肿瘤体积变化，绘制肿瘤生长曲线，计 算肿瘤体积变化率；HE染色观察肿瘤、肝脾组织变化。 100％，给药前，所有裸鼠肿瘤体积无显著性差异；给药后，MI)P-Ab组肿瘤体积大小 均明显小于对照组、未偶联的抗CDIO抗体组及未偶联的MDP组，但大于LPS组及 (3)各组肿瘤体积变化率：对 如P—Ab+LPS组，且以如P—Ab+LPS组体积变化最小； 照组、未偶