柳树AP3同源基因的克隆与表达分析.pdf

摘 要 dP3基因在植物的花发育过程中具有重要作用，作为“ABC”模型的B类基因，AP3 或丹与AG的作用决定雄蕊的特征。根据已知的杨树AP3同源基因PTD的保守区序列设计 引物，以垂柳、黄花柳、黄枝白柳、杞柳、绵毛柳及簸箕柳总DNA为模板，均扩增出了大 编码241个氨基酸，预测分子量大小为28kDa。 根据基因组扩增片断测序结果以及簸箕柳SSMADS基因全长cDNA序列，预测出垂柳、 黄花柳、黄枝白柳、杞柳、绵毛柳中／503同源基因的全长eDNA。分析表明，本实验所克 隆的柳属植物AP3同源基因，在核苷酸水平和氨基酸水平均有很高的相似性，分别为 保守区域，说明该基因在柳属植物中具有较好的保守性。 通过实时定量RT—PCR分析，发现SSg：II)S基因主要在簸箕柳花器官中表达，在根、茎、 叶中虽然有少量表达，但表达量很低。在花器官发育的不同阶段，SSMADS基因表达量也 不同，在花发育的早期阶段，其表达量较低，随着花器官的发育，其表达量有所增加，然 后随着花器官的成熟表达量又降低。 50mg／L 烟草，得到95株潮霉素抗性芽。当芽长到1．5cmc以上时，移入附加有hygromycin 的MS培养基上，大部分植株在20天左右都能正常生根。对22株转基因抗性植株进行检 测，18株为PCR阳性。转基因烟草在转化前后花器官的表型变化尚在观察之中。烟草转 化的成功为进行簸箕柳的转化奠定了一定的技术基础。 以簸箕柳当年春季萌生的新枝条为外植体，建立了其植株再生体系。探讨了基本培 养基和不同组合的激素对丛生芽诱导的影响，结果表明不同基本培养基对丛生芽的诱导无 平均诱导芽数为3个／株；芽的生长状况也较好。当丛生芽长到3cm左右时，切下，在不 加激素的White或B5两种基本培养基诱导其生根，生根率可达90％以上。簸箕柳组培再 生体系的建立为进一步用转基因方法验证簸箕柳AP3同源基因的功能提供了技术平台。 关键词：簸箕柳；AP3同源基因；克隆；表达分析；烟草转化 Abstract infloral aBclass AP3 roles development．Asgene playsimportant orP／andAGcontrolthe ofstalnen of were developmenttogether．Apairprimersdesigned tO an2．1K was accordingpublishedPopulustrichocarpagene(PTD)，andfragmentamplified the DNAof (PCR)byusinggenomic Salix．eriocladaandSal及．suchowensis respectively． 5’RACEand3’RACE AP3 wasobtainedinthe homologue Byusing technique．the gene cDNA Was826 andencodedfora of S．suchowensis．The sequence bp polypeptide completed amino molecular 241 acids，28KD weight． of DNA