动物病原学实验(动药专业).ppt

基础培养基制备 1、配方： 牛肉膏5克　蛋白胨10克　NaCL5克 磷酸氢二钾1克　蒸馏水1000ml 2、按量称取→溶解→调PH→过滤 →分装10根短管→灭菌→菌检 琼脂培养基的制备 测好PH后，取500ml肉汤至量筒，余下的倒入大烧杯，把量出的500ml再倒入锅中，称量10g琼脂，边加热边搅动，看一下水位，补足水分。 琼脂完全溶解后以棉花沙布过滤，分装10根长管。 返回★ 作业 1、制作培养基时应注意哪几点？为什么高压灭菌前需调PH稍高些？ 2、测较少量肉汤培养基的酸碱度至PH7.6时，采用0.1N　NaOH溶液，而将全部肉汤培养基调至PH7.6时，却改用1N　NaOH溶液，为什么？ 3、普通肉汤与普通琼脂培养基各有什么用途？ 实验四　细菌的分离培养及移植 一、目的要求 1、 掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法 2、 使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落 二、实验材料 1、培养基：普通琼脂平板 每人2块 普通琼脂斜面、普通肉汤 每人各1支 2、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面、大金混合肉汤、感染大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的小白鼠 3、酒精灯、接种棒、剪刀、镊子、记号笔 三、需氧分离培养方法： 1、 平板分离培养法：平板划线法、倾注培养法（不常用） 2、 芽胞需氧分离培养法：80℃　15－20分钟　杀死不耐热细菌 3、 化学药品分离培养法 4、 实验动物分离培养法 四、实验内容： 1、 平板划线法（组织→平板）、（金+大）肉汤→平板，每人二块 2、 肉汤培养（斜面→肉汤），每人一支，（大）斜面→肉汤　 3、 斜面移植（斜面→斜面），每人一支，（金）斜面→斜面 接种完标明细菌、日期、自己的记号，置37℃，恒温箱培养24小时（平板倒置），第二天抽时间看培养结果。 五、作业 1、 何谓纯培养？分离纯培养的目的何在？ 2、 在挑取固体培养物上的细菌作平板划线时，为什么每次都要将接种环上剩余的细菌烧掉？ 3、 为什么要把培养皿倒置培养？ 1、 平板划线法（组织→平板）、（金+大）肉汤→平板，每人二块 2、 肉汤培养（斜面→肉汤），每人一支，（大）斜面→肉汤　 3、 斜面移植（斜面→斜面），每人一支，（金）斜面→斜面 一、目的要求 1、掌握细菌分离培养的基本要领和常用方法 2、使被检材料适当稀释，以求获得独立单在菌落 实验材料 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面 大肠杆菌金黄色葡萄球菌混合肉汤 实验动物：感染了大肠杆菌金黄色葡萄球菌的小白鼠 培养基：普通琼脂平板、斜面、 二、需氧分离培养方法 1、平板划线分离培养法：平板划线法、倾注培养法（不常用） 2、芽胞需氧分离培养法：80℃　15－20分钟　杀死不耐热细菌，再接种至平板 3、化学药品分离培养法：抑菌作用 杀菌作用 鉴别作用 4、实验动物分离培养法：本种动物或小鼠 三、实验内容 1、平板划线法（金黄色葡萄球菌+大肠杆菌肉汤→平板），每人一块，小鼠肝脏→平板，每人一块 2、肉汤培养（斜面→肉汤），每人一支，大肠杆菌斜面→肉汤　 3、斜面移植（斜面→斜面），每人一支，金黄色葡萄球菌斜面→斜面 破伤风梭菌，芽胞染色 实验二 细菌抹片的制备方法、染色及显微镜观察 实验二　细菌抹片的制备方法、染色及显微镜观察 ? 一、???????? 目的要求： a)??????? 掌握细菌抹片的制备方法 b)??????? 掌握几种常用的染色方法和技术及无菌操作技术 c)???????? 巩固显微镜的使用，并了解细菌的染色特性、形态 二、???????? 材料：炭疽杆菌、葡萄球菌、大肠杆菌斜面，大肠杆菌肉汤 三、???????? 制片及染色步骤：取干净玻片→抹片→干燥→固定→染色→干燥镜检 四、???????? 常用的几种染色方法 1、??????? 革兰氏染色法 （1）???? 草酸铵结晶紫染液1-2分钟，水洗 （2）???? 革兰氏碘液媒染1-3分钟，水洗 （3）???? 95%酒精脱色30秒-1分钟，水洗 （4）???? 沙黄水溶液复染10-30秒，水洗 （5）???? 吸干，镜检 2、??????? 姬姆萨染色法 （1）???? 甲醇固定3分钟，时间长短均可 （2）???? 姬姆萨液足量30分钟或数小时至24小时，水洗 （3）???? 吸干，镜检 3、???????