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工程菌发酵产酶及其在1丙二醇耦合酶催化制备中的应用-Core
化 工 进 展 2010 年第29 卷第11 期 CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS ·2143 · 研究开发 工程菌发酵产酶及其在 1, 3-丙二醇耦合酶催化制备中的应用 1 1 1 1 1,2 彭益强 ,庄 园 ,林志强 ,黄文爱 ,方柏山 1 (华侨大学厦门校区省工业生物技术实验室,福建 厦门 361021 ; 2 厦门大学化学化工学院,福建 厦门 361005 ) 摘 要:培养定向进化后的质粒保藏菌E. coli BL21 (DE3 )pLysS /PET-15b-dhaT’-24 并进行质粒抽提,将抽提 的质粒转化入感受态宿主细胞E. coli BL21 (DE3 )pLysS 中得产1,3-丙二醇氧化还原酶的工程菌。工程菌经乳糖 诱导后进行发酵培养获得酶活为 182 U/mL 的1,3-丙二醇氧化还原酶,最适反应pH 值为 10,pH 值稳定范围为 7.0~9.0 ,最适反应温度为55 ℃,温度稳定范围为30~45 ℃。利用工程菌产的1,3-丙二醇氧化还原酶进行转化 3-羟基丙醛为 1,3-丙二醇的反应,同时偶联甘油脱氢酶(由另一工程菌制备)转化甘油的反应进行辅酶 NADH 的再生,实现了 1,3-丙二醇的双酶耦合的连续反应。由于来源于工程菌的双酶酶学性质相适应,反应连续进行 34 h 后,底物3-羟基丙醛的转化率达63.4% ,产物1,3-丙二醇的产率达64.6%。 关键词:1,3-丙二醇氧化还原酶;工程菌;辅酶再生;1,3-丙二醇 中图分类号:TQ 923 文献标志码:A 文章编号:1000 –6613 (2010 )11 –2143 –06 Enzyme from engineering strain and application in 1, 3-propanediol coupling-enzymatic catalysis 1 1 1 1 1,2 PENG Yiqiang ,ZHUANG Yuan ,LIN Zhiqiang ,HUANG Wenai ,FANG Baishang 1 (Provincial Key Laboratory of Industrial Biotechnology ,Hua Qiao University ,Xiamen 361021 ,Fujian ,China ; 2College of Chemistry and Chemical Engineering,Xiamen University ,Xiamen 361005 ,Fujian ,China ) Abstract :Engineering strain was acquired by transforming directly evolved plasmid from the incubated conservation bacterium E. coli BL21 (DE3 )pLysS/PET-15b-dhaT’-24 to the host cell E. coli BL21 (DE3 )pLysS. The lactose induced engineering strain was fermented to
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