兔病毒性出血症病毒次要结构蛋白( VP2) 的表达和细胞内定位分析.pdfVIP

中国动物传染病学报 　2009 ,17 (2) :1 - 7 　 Chinese J our nal of Animal Infectiou s Di sea se s ·研究论文 · 兔病毒性出血症病毒次要结构蛋白 ( VP2) 的表达和细胞内定位分析 陈 柳 ,刘光清 ,倪 征 ,余 斌 ,云 涛 ,华炯钢 ,李双茂 (浙江省农业科学院 农业部病毒学与生物技术重点实验室 ,杭州 310021) ( ) 摘 　要 : 病毒蛋白V P2 是兔出血症病毒 Rabbit Hemorrhagic Di sea se Viru s ,R HDV 的一种次要结构蛋白。本文 旨在构建 V P2 与绿色荧光蛋白融合的真核表达载体 ,进而利用它研究 V P2 在细胞内的定位情况 。首先在大肠杆 菌中表达 GSTV P2 融合蛋白,然后用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗 V P2 的抗血清 。对制备的抗 V P2 抗血清进 行特异性分析 ,再利用该抗体对转染 p E GFPV P2 的B H K2 1 细胞进行检测 , 以研究 V P2 蛋白在细胞内的定位情 况 。结果表明 ,p E GF PV P2 转染 B H K2 1 细胞后 ,不仅 V P2 蛋白得到了成功表达 ,而且通过检测偶联的绿色荧光 蛋白可判断出 V P2 蛋白主要分布于 B H K2 1 细胞的细胞质 。本研究成功构建了 V P2 与绿色荧光蛋白融合的表达 载体 ,并在真核细胞内实现了表达 ,通过检测荧光蛋白,发现 V P2 主要在细胞质内表达并分布 ,为深入探讨 V P2 的 生物学功能奠定了基础 。 关键词 : 兔出血症病毒 ;V P2 ;次要结构蛋白;细胞内定位 中图分类号 : S858 . 29 1. 265 :Q7 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 1674 - 6422 (2009) 02 - 000 1 - 07 INTRACELL ULAR LOCAL IZATION OF THE MINOR STRUCTURAL PROTEIN ( VP2) OF RABBIT HEMORRHA GIC D ISEASE VIRUS( RHD V) C H EN Liu , L IU Guangqing ,N I Zhen g , YU Bin , YU N Tao , HU A J ionggang , L I Shuangmao ( Key l aboratory of V i rol og y B iotech nol og y of M i nis t ry of A g ric ul t u re , Z hej i ang A ca demy of A g ric ul t u re S ciences , H ang z hou , 31002 1 , Ch i n a) Abstract : Viru s p rot ein V P2 i s a minor st r uct ural p rot ein of rabbit hemor r hagic di sea se vir u s ( R HDV ) . The o bj ective of t he p re sent st udy wa s to st udy t he exp re ssion an d int racellular localization of V P2 in eukaryotic cell s by f u sion w