液质联用技术及应用浅谈-王峰.ppt

条件的选择 对于选定的溶剂体系，通过调整溶剂比例和流量以实现好的分离。值得注意的是，对于LC分离的最佳流量，往往超过电喷雾允许的最佳流量，此时需要采取柱后分流，以达到好的雾化效果。 条件的选择 质谱条件的选择主要是为了改善雾化和电离状况，提高灵敏度。 调节雾化气流量和干燥气流量可以达到最佳雾化条件，改变喷嘴电压和透镜电压等可以得到最佳灵敏度。 对于多级质谱仪，还要调节碰撞气流量和碰撞电压及多级质谱的扫描条件。 在中药和天然药物中的应用 LC/MS/MS鉴定苏薄荷中的黄酮类成分 仪器与试剂 仪器：WATERS2695型液相色谱仪；Micromass公司Qattro micro 串联四级质谱仪，ESI接口，Masslynxv4.0工作站。 试剂：乙腈为色谱纯，无水乙醇、甲醇、冰醋酸为分析纯 对照品：橙皮苷；蒙花苷；椴树素；香叶木素7-O-葡萄糖苷 实验样品：薄荷（除去挥发油） 在中药和天然药物中的应用 实验方法 色谱条件：色谱柱Lichrospher C18柱（250mm X 4.6mm）。柱温：35；流动相：乙腈，0.5%冰醋酸溶液，梯度洗脱0-80乙腈由5%-70%；流速0.5mL/min，检测波长345nm。 质谱条件：ESI；离子源温度110正离子检测；去溶剂气(N2)流速为350L/h；锥孔气（N2）流速为50L/h;毛细管电压为3.0kV；扫描范围为m/z200-1000,50-350；锥孔电压：30V, 60V；碰撞气体为氩气；碰撞室能量：40v. 样品处理：药材粉末2g，精密称定，70乙醇提取。进样10uL 在中药和天然药物中的应用 LC-UV DAD检测，发现多个色谱峰具有黄酮类成分的紫外特征吸收 在中药和天然药物中的应用 1号峰的LC/MS/MS分析 M+H 146 Rha残基 162 Glc残基 对301.4进行二级裂解 286.2 258.2 153.1 229.2 110.9 与香叶木素一致 香叶木苷 在中药和天然药物中的应用 5号峰的LC/MS/MS分析 595.4 M+H 449.5 M+H-146 287.4 M+H-146-162 153.4 133.0 RDA裂解 在中药和天然药物中的应用 7号峰的LC/MS/MS分析 331.4 M+H 316.4 M+H-CH3 301.2 M+H-CH3-CH3 298.3 M+H-CH3-H2O 213.3 119.1 RDA 183.1 213.3-2xCH3 百里香新 在中药和天然药物中的应用 在中药和天然药物中的应用 黄酮裂解规律 1. 裂解主要发生在C环上，通过不断的调节锥孔电压，得到逐个脱糖的碎片离子，以糖完全脱去后产生丰度最大苷元碎片，对苷元碎片进行CID，可根据碎片碎片的裂解情况推测苷元的结构。 2. 常常观察到丢失H2O，CO，C2H2O和连续丢失这些小基团生成的离子。这些中性丢失可用于鉴别特殊官能团的存在，如M+H-15表示存在甲氧基。偶电子生成奇电子是少见的，对于黄酮类化合物，由于有大的?体系，故可以产生奇电子离子。 在中药和天然药物中的应用 黄酮裂解规律 3. 黄酮类化合物常用正离子模式，负离子模式提供补充信息。在负离子模式中，1,3A-离子常常是主要碎片，而0,3B-离子是异黄酮的特征主峰。 在中药和天然药物中的应用 木犀草素准分子离子的裂解途径 在中药和天然药物中的应用 木犀草素准分子离子的裂解途径 在中药和天然药物中的应用 木犀草素准分子离子的裂解途径 在中药和天然药物中的应用 栎精准分子离子的裂解途径 * * Content Layouts * Content Layouts 接口技术的发展 1、LC/MS联用仪器组成部分 TSP DLI EI离子化；LC流出液分流；得到CI质谱；灵敏度牺牲 热喷雾。能分析热不稳定化合物；灵敏度低；应用范围有限 FAB MAGIC 单分散气溶胶。EI离子化技术，可EI谱图库检索；小分子，热稳定，可气化样品 实验困难；较高的化学背景 API API是一种在大气压下将溶液中的分子或离子转变成气相中离子的接口，包括大气压舱（雾化去溶剂区域和离子化区域）、离子转移器（将离子从大气压转移至MS的真空）两部分。 有电喷雾电离（electrospray ionization ,ESI）、大气压化学电离（atmospheric pressure chemical ionization ,APCI）两种操作模式。 同: 都属于软电离技术， 不同:在大气压下产生气相离子的方式不同。 ESI只能用于离子型样品，喷雾后即是气相离子。而APCI具有电晕放电针，因此还可用于非极性样品的电离。 其次是待测物质的相对分子质量范围不同。 一般二者共用一个API箱体