化学发光免疫分析技术的发展.ppt

化学发光免疫分析技术的发展 深圳市新产业生物医学工程有限公司 合肥兴科天合生物科技有限公司 报告人:饶微（博士）、汪竟成（经理） 概念 化学发光免疫分析是将灵敏的化学发光或生物发光体系与特异的抗原抗体免疫测定结合于一体的检测技术。 原理 化学发光 由于化学反应产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。 免疫测定 是利用抗原抗体反应来测定标本中微量物质的方法。 化学发光的分类 酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统 非酶促化学发光： 吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统 化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型 第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的敏感性； 第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。 化学发光免疫分析目前分类 按发光剂不同分为 1.发光酶免疫测定技术（CLEIA） 2.化学发光免疫测定技术(CLIA) 3.电化学发光免疫测定技术(ECLIA)escence immunoassay 发光酶免疫测定技术（CLEIA） 属于酶免疫测定的一种。只是最后一步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。 技术类型 根据酶促反应底物不同可分为 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术 根据免疫学反应模式分 1.双抗体夹心法和双抗原夹心法 2.固相抗原竞争法： 化学发光免疫测定技术（CLIA） 用化学发光剂直接标记抗原或抗体,与待测标本中相应Ab或Ag、磁颗粒性的Ag或Ab反应，通过磁场把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，然后加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性检测 。 技术类型 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 同酶发光免疫测定技术 3.不同只是相应标记物是吖啶酯而不是酶 电化学发光免疫测定技术（ECLIA） 是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量。 技术类型 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 同酶发光免疫测定技术 3.相应标记物是三联吡啶钌而不是酶 化学发光免疫分析的优点 1、灵敏度高： 这是CLIA关键的优越性，其灵敏度可达10-16/-21mol/L（RIA为10-12mol/L）。又如化学发光底物（如AMPPD）可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5х105倍。 2．线性范围宽： 发光强度在4～6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（OD值）为2.0的范围相比，优势明显。也优于放射免疫分析技术。 3、安全性好： 彻底消除了放射性危害，环保、安全。 到目前为止，还未发现CLIA的危害性。 4、试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化学发光相比，有效期长可以降低使用成本，利于推广应用。 5、光信号持续时间长 辉光型（glow type）的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。容易实现连续、动态、重复测定 6、分析方法简便快速 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂（或复合试剂）的一步模式，容易实现自动化。 7、结果稳定、误差小 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。 8、临床应用广 1）甲状腺激素 2）生殖激素 3）肾上腺/垂体激素 4）贫血因子 5）肿瘤标记物 6）感染性疾病 7）糖尿病 8）心血管系统 9）病毒标记物 10）骨代谢 11）过敏性疾病 12）治疗药物监测 德国lumino准自动化学发光免疫分析系统介绍合肥兴科天合生物科技有限公司 免疫定量分析的两大关键技术: 1、标记技术：决定方法的理论灵敏度