污染土壤中原位阿特拉津降解菌的分离和鉴定3-土壤学报.pdfVIP

第 43 卷 第 3 期 土 　壤 　学 　报 Vol43 ,No3 2006 年 5 月 ACTA PEDOLOGICA SINICA 　May ,2006 污染土壤中原位阿特拉津降解菌的分离和鉴定 代先祝 　胡 　江 　蒋建东 　徐 　玮 　李顺鹏 (南京农业大学生命科学学院 ,农业部农业环境微生物工程重点开放实验室 ,南京 　210095) 摘 　要 　　为克服传统富集培养分离降解菌的局限性 ,直接将长期受阿特拉津污染的土壤稀释后 ,涂布 于加有土壤浸出液和阿特拉津农药的平板 ,分别从两个采 自不同地区的污染土壤中各分离了一株高效广谱 降解菌 AG1 和 ADG1 :它们能以阿特拉津为唯一碳源 、氮源和能源生长 ,能分别在 44 h 和 48 h 内降解 1 000 mg L - 1 的阿特拉津 ,降解率 100 % ;它们还能以扑草净 、西玛津等三嗪类除草剂为唯一氮源生长 。16S rDNA 核 ( ) 苷酸序列分析结果表明菌株 AG1 与 ADG1 都与节杆菌属 A rthrobacter 的细菌有高度同源性 ,结合两株菌的形 态特征及生理生化特征 ,将它们鉴定为 A rthrobacter spp 。PCR 扩增两株菌的降解基因 ,结果表明它们的降解 基因都是 trzN 和 atzB C 的组合 ,这是国内首次报道具有该基因类型的阿特拉津降解菌 。 关键词 　　阿特拉津 ;原位降解菌 ;分离 ;鉴定 ; 降解基因类型 中图分类号 　　X172 　　　　　文献标识码 　　A ( 　　阿特拉津 2氯4乙胺基6异丙胺基1 ,3 ,5三 ) 嗪 是一种广泛使用的三嗪类除草剂 ,它在土壤中的 1 　材料与方法 半衰期长 ,可移动性较强 ,可通过地表径流 、淋溶 、干 沉降和湿沉降等途径进入地表水和地下水[ 1 ,2 ] ,从 11 　样品及培养基 而对水生生态环境和人类饮用水源构成威胁[3 ] 。 土壤样品 1 采 自浙江某化工厂存放阿特拉津仓 阿特拉津在土壤中主要通过微生物的作用被降 库旁土壤 1～10 cm 表层土 ,属水稻土 ,p H 85 ,有机 解 。到目前为止 ,人们已分离了很多阿特拉津降解 质含量 112 g kg - 1 ;土壤样品 2 采 自山东某地长期 菌 ,并对其中的 Pseudomonas sp ADP 菌株的降解基 使用阿特拉津的玉米地 5 ～10 cm 表层土 , 属黄潮 [4～6 ] 因 atzAB CD 和酶进行了详细的研究 ,对其他菌 土 ,p H 74 ,有机质含量 205 g kg - 1 。土样过 40 目 的研究发现阿特拉津降解基因 atzAB C 具有高度的 筛后 4 ℃保存备用 。 保守性[7 ] 。然而 ,这些菌几乎都是采用富集培养方 土壤浸出液 :取相应土样 50 g ,加入装有 100 ml 法分离的 , 由于富集过程中培养条件的选择性 ,所得 - 1