共振光散射光谱及其分析应用.pdfVIP

第 ３３卷 分析化学 （ＦＥＮＸＩＨＵＡＸＵＥ）　研究简报 第 ３期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 P ２００５年 ３月S ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ３７７～３８０ 2 2 P W D 十六烷基溴化吡啶与脱氧核糖核酸作用的 W F 共振光散射光谱及其分析应用 ( W T r i . a ＊１ ２ １ C 冯素玲 　刘雪平　樊　静 l １ C V （河南师范大学化学与环境科学学院，河南省环境污染控制实验室，新乡 ４５３００７） Y ２ e （平顶山学院化学系，平顶山 ４６７０００） r T s i . o N n 摘　要　在碱性条件下，十六烷基溴化吡啶 （ＣＰＢ）与脱氧核糖核酸 （ＤＮＡ）共存时，体系产生较强的共振光散 E ) 射，其强度与 ＤＮＡ浓度呈线性关系，据此提出了基于阳离子表面活性剂的共振光散射法定量测定 ＤＮＡ。在 T 最佳实验条件下，测得小牛胸腺 ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）和鱼精子 ＤＮＡ（ｆｓＤＮＡ）的线性范围分别为 ０．２～２．０ｍｇ／Ｌ和 ０．２～１．２５ｍｇ／Ｌ，检出限分别为 ０．０７ｍｇ／Ｌ和 ０．０５ｍｇ／Ｌ。该方法已应用于合成样品及实际样品中 ＤＮＡ含量 的测定。 关键词　共振光散射，脱氧核糖核酸，十六烷基溴化吡啶 １　引　　言 ［１］ ＤＮＡ是生物体内重要的遗传物质。目前，定量测定 ＤＮＡ的方法通常有分光光度法 、荧光分析 ［２～５］ ［６］ ［１］ 法 及放射标记法 。其中，分光光度法灵敏度低，耗时长 。荧光分析法应用极为广泛，但是有些 有机染料有毒，价格昂贵，不易获得。放射标记法测定 ＤＮＡ灵敏度高，但受放射周期的限制，同时放射 性试剂污染严重，不易处理。 共振光散射 （ＲＬＳ）分析法近年来在生物大分子及离子缔合物的分析中应用越来越广泛，可以用来 ［７］ ［８，９］ ［１０～１２］ 测定金属离子 、蛋白质 及核酸 等，对生物分析技术的发展有着重要的意义。采用共振光散 ［１０］ ［１１］ ［１２］ 射法测定 ＤＮＡ，主要使用有机染料试剂，其中包括结晶紫 、天青 Ａ 、甲基紫 等，但没有用于实际 样品分析。本实验研究了带正电荷的十六烷基溴化吡啶 （ＣＰＢ）通过静电作用与 ＤＮＡ结合，使体系的共 振光散射增强，由此定量测定 ＤＮＡ。该方法快速、简便、灵敏度高、稳定性好，检出限达 ０．０５ｍｇ／Ｌ，已成 功应用于合成样品及实际样品中 ＤＮＡ含量的测定。 ２　实验部分 ２．１　仪器与试剂 ＦＰ-６２００荧光分光光度计 （日本分光公司）；ｐＨＳ-３Ｃ型数字酸度计