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发酵车间染菌问题的研究 陈亮 （浙江医药股份有限公司新昌制药厂） 摘要：针对微生物发酵车间生产中的染茵问题，分析其检查方法及主要原因，并结合生产实际提出相应的防止措施。一旦发生染茵，及时采取补救措施，把发酵染茵造成的损失降到最小。 关键词：染茵；检查方法；原因分析；防止补救措施 Discussion of Infection Occurred in fermenting room Chen Liang (Zhejiang Medicine Co.Ltd.Xinchang Pharmaceutical Factory) Abstract：With respect to the problem ofinfection occurred in microbial fermenting room, the method of examination and the primary causes were analyzed in this article. The protection method combined with the practice of production was pressented. Thus, the remedial method can be taken an the loss can be limited to as low as possible degree when infection takes place. Keywords： infection ；method of examination； causeanalysis； remedialm 困扰微生物发酵的一个问题，就是染菌的问题，发酵过程通常是微生物纯种培养过程，培养过程中只允许特定的微生物生长，如果发酵过程中除目的菌外还有其他微生物存在，就视为染菌，染菌严重影响目的菌的生长，导致发酵失败。今天大面积染菌的问题已经基本解决了，零星罐染菌的现象，仍时有发生，造成染菌的原因很多，尤其是无菌程度高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。本文结合企业实际生产情况，综合6年来积累的车间生产实践经验，谈谈染菌原因的分析、检查方法、染菌后的补救措施和防止措施，重点谈谈防止措施，供同行参考。 1. 染菌的检查方法 检查杂菌的方法要求准确可靠和快速，在发酵过程中对杂菌污染的及早发现，及时处理，是免除染菌造成严重损失的重要问题。因此，要求有确切、迅速的方法来检出杂菌的污染，目前常用方法主要有以下几种： 1．1显微镜检查法 通常用革兰氏染色法，根据生产菌与杂菌的特征区别，判断是否染菌。若发现与发酵菌不同形态的微小球菌、不动长杆菌、游动杆菌等，说明己感染杂菌。 1．2平板划线培养检查法 培养基为营养琼脂，将其配好后121℃湿热灭菌25～30min，然后冷却到45～50℃倒入培养皿，冷却后置于37℃恒温箱内无菌培养24h，挑出无菌落出现的平板备用。将要检查的样品划线接种，置于37℃恒温箱内培养24h后观察。如发现有霉菌，黄色、白色等非无色透明有粘连性的菌落出现，说明己染菌。 噬菌体检查可采用双层平板培养法，底层同为肉汁琼脂培养基，上层减少琼脂用量。先将灭菌的底层培养基熔后倒平板，凝固后，将上层培养基熔解并 保持摄氏40度，加生产菌作为指示菌和待检样品混合后迅速倒在底层平板上，置培养箱保温培养，经12~20h培养，观察有无噬菌斑。 ?培养基（PH7.0） 葡萄糖（%） 牛肉膏（%） 蛋白胨（%） 氯化钠（%） 琼脂（%） 上层 0.5 1.0?? 1.0?? 0.5 1.0? 下层 0.5 1.0?? 1.0?? 0.5 2.0 1.3肉汤培养检查法 将需要检查样品接入经灭菌并经过检查无菌的肉汤培养基中，放置摄氏37度培养24h，进行观察，并取样镜检。此法常用于检查培养基和无菌空气是否带菌，也可用于噬菌体检查，此时使用生产菌作为指示菌。葡萄糖酚红肉汤培养基：牛肉膏0.3%，葡萄糖0.5%，氯化钠0.5%，蛋白胨0.8%，1%酚红溶液0.4%，PH7.2。 用以上的检查方法检查未发现污染，还不能肯定未被污染。 除以上方法外，还可以从发酵过程的异常现象来判断是否染菌，如溶解氧、PH值、排气中CO2含量和菌体酶活力等变化来判断。 2染菌原因的分析 在发酵染菌之后，必须分析染菌原因，总结发酵染菌的经验教训，把发酵染菌消灭在发生之前，防患于未然，是积极制服发酵染菌的最重要措施。造成发酵染菌的原因很多: 2.1根据染菌的时间分析 早期染菌，很可能是由于种子带杂菌，操作不当，培养基或设备灭菌不彻底所致；中后期染菌，多数是 由于空气系统带人、设备渗漏、中间补料或取样操作不当等原因引 起 的 。 2.2根据染菌的类型分析 染有耐热性芽孢