文昌鱼miR--183和miR--216基因簇的表达模式和保守性研究.pdfVIP

十目％#^学砸}{*№女 摘要 保守的内源性非编码小RNA。它们在后生动物基囡组中普遍存在，是生物基凼 滴控网络的重要组成。越来越多的证据表明．miRNAs在动物发育和人类疾病发 生中发挥重要作用。它们广泛参与胚胎早期发育、器官形成、细胞增殖分化、细 胞凋亡等生理过程，并对肿瘤发生有一定影响。 miRNA基因簇(miRNAcluslers)是指miRNA基因在染色体上紧密分布的现 象。miRNA基因簇在动物中是较常见的现象，其在细胞基因表达调控的网络系 统中发挥重要作用，比单个miRNA的调控模式更加复杂，功能作用更加高效。 但相对于单个miRNA，miRNA基因簇在表达、功能和进化方面的研究仍处于起 步阶段。因此，有必要对现有的miRNA基因簇进行深入研究。同时，对一些高 度保守的基因簇进行研究，将有助于我们理解miRNA的起源与发生以及相关的 动物类群的演化和发展。 miR．1 83基因簇是一个在后12]动物中高度保守的基因簇，在脊椎动物中编码 83。 miR．】82、miR一96和miR-I83这3个miRNAs，文昌鱼中则只有miR-96和miR一1 因簇，不存在于无脊椎动物。本论文以经典模式动物——文昌鱼为研究对象，鉴 的组织分布及在胚胎中的表达规律，与其他生物的表达谱进行比较研究，结合前 期靶基因的研究结果，以此推测其可能的功能以及在脊椎动物起源和演化中的意 义。 belcheri 本研究从青岛文昌鱼(Branchiostomatsingtauense)中鉴定获得了 miR一183基因簇和miR．216基因簇，并对其在组织和胚J]自ae的时空表达模式及保 守性进行了分析研究。 首先，根据佛罗里达文昌鱼miR一183基因簇和miR-216基因簇各基因家族 成熟序列及前体序列设计引物，鉴定获得了青岛文昌鱼miR一183基因簇和 83基因簇和miR-216基 miR．216基因簇各成员相应序列。通过比较分析，miR一1 因簇都保守存在于后口动物中。 83基瑚簇和miR一2】6基因蔟各家族 其次，应用实时定量PCR技术对miR—l 83基因簇 成员在文吕鱼成体各组织tp的表达情况进行了研究。结果表明，miR-l miRNAs在文昌鱼背神经管中表达量最高．在肝亩囊和脊索中的表达擐较弱，在 剩余其他组织中的表达量则较低：miR一216基因簇miRNAs在鳃中的表达量最高， 肝卣囊中袁达量次之，在剩余其他组织中的表达量很低。 83基因簇在组织和胚胎中的表达进行了研 最后，应用原位杂交技术对miR．I 83基因簇miRNAs在早期胚胎及一天幼 究。整体胚胎原位杂交结果显示，miR．1 虫中均没有表达，在两天幼虫的背神经管中明显表达。组织切片原位杂交结果则 显示，miR一183基因簇在背神经管、肝盲囊和鳃中表达。 83基因簇和miR一216基因簇均 根据上述结果我们可以得}H以下结论：miR—l 表现出组织特异性表达，前者主要在背神经管中表达，后者主要在鳃和肝盲囊中 表达；miR．183基因簇参与文吕鱼感觉神经器官的发育和功能，miR-216基因簇 则可能与脊椎动物胰脏的起源有关。 83基因簇；miR-216基因簇：表达模式；保守性 关键词：文昌鱼：miR-I and The ofmiR一183 expressionpattern