中空纤维测试法简介中空纤维测试法简介.pdf

纤维测试 抗肿瘤药物高通量体内筛选 SPECTRUM LABORATORIES, INC. 仅供spectrum及其经销商参考使用 抗肿瘤药物药效学筛选通常需要通过体外细胞实验、动物体内 实验和人体临床实验3个步骤。 动物体内实验旨在分析药物体内活性和/或毒性，常采用一种或 多种肿瘤模型，是药物筛选的关键步骤，但往往需要大量的时间、 成本和精力。 中空纤维药物筛选模型有效地解决了快速体内筛选的方法学问 题。 中空纤维测试法 （Hollow Fiber Assay：HFA） HFA是将一定数量的某种肿瘤细胞装入中空纤维管，再将中空 纤维手术植入裸鼠体内，然后给予受试药物，治疗结束后取出中空 纤维管，用各种方法 （如MTT ）分析肿瘤细胞活性，从而得出药物 体内抗肿瘤活性的方法。 中空纤维规格： ▫ 材料：改良的聚偏二氟乙烯（mPVDF） ▫ MWCO：500 kD ▫ 良好的生物相容性和稳定性 ▫ 耐有机溶剂、酸、碱和高温 ▫ 可高压灭菌和热密封处理 ▫ 内腔适于细胞生长 中空纤维测试法 （Hollow Fiber Assay：HFA） HFA优势： ▫ 提供全真体内环境，考量药物受体内转运、代谢的影响。 ▫ 节约成本、提高效率 ▫ 扩大筛选肿瘤的种类 ▫ 可用于细菌、霉菌、病毒感染细胞检测 NCI标准抗肿瘤筛选细胞株： ▫ 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231/MDA-MB-435 ▫ 人胶质瘤细胞株SF-295/U251 ▫ 人卵巢癌细胞株OVCAR-3/OVCAR-5 ▫ 人结肠癌细胞株COLO-205/SW-620 ▫ 人黑色素瘤细胞株LOX-IMVI/UACC-62 ▫ 人肺癌细胞株NCI-H23/NCI-H522 中空纤维测试法 （Hollow Fiber Assay：HFA） HFA操作步骤： 1. 细胞培养 2. 细胞封装 3. 纤维植入 4. 给药处理 5. 细胞回收 6. 细胞检测 与移植瘤法相比： ▫ 低风险 ▫ 高通量（一次筛选3-4个细胞株） ▫ 实验周期短 ▫ 所用实验动物/受试药量少 ▫ 假阴性率低 ▫ 各细胞株间无干扰 HFA应用实例：抗肿瘤活性研究 通过HFA检测茚并异喹啉Top Ⅰ抑制剂衍生物的抗肿瘤活性。 通过HFA评估三肽化合物酪丝亮肽 （YSL ）对肝癌的治疗效应。 HFA应用实例：抗肿瘤活性研究 通过HFA研究阿霉素治疗ESFT的可信性和可重复性。 双吲哚类衍生物抗肿瘤活性体内筛选。 HFA应用实例：针对其它细胞的药物活性研究 使用HFA和32D-mpl细胞系，研究非肽小分子TPOR激动剂的体 内活性，发现其可刺激细胞增殖，抑制凋亡，同时有助于细胞信 号传导和转录激活子的磷酸化。说明是HFA是一种特异、高效的 体内活性评估模型。 HFA应用实例： 使用HFA，收集LNCap细胞向雄激素非依赖性发展过程不同阶 段的 “纯”细胞，收集的细胞无宿主源性干扰，可提取无污染的 RNA和蛋白质等，以进行基因组学、蛋白组学分析，包括基因转 录调节分析，以及建立针对不同激素的细胞亚系。 HFA应用实例：机制研究 使用HFA和A549肺癌细胞系，验证紫杉醇和康普力停A1对微 管和细胞周期的干扰作用。说明HFA可用于除药效之外的药理机 制研究。 HFA应用实例：机制研究