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认知功能障碍论文：BMSC向神经细胞分化诱导后上清液对MCI大鼠治疗作用的实验研究 【中文摘要】探讨3代、4代、5代大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导后12h上清液对认知功能障碍大鼠的治疗作用。方法：1、大鼠BMSC的分离、培养和鉴定BMSC采用全骨髓贴壁培养法，用流式细胞仪对选取的第3代BMSC，按/mL水平分别置于5个检测管后加入小鼠抗大鼠CD29抗体、CD44抗体、CD34抗体以及用于对照的IgGI和空白对照进行检测。2、细胞爬片和诱导与鉴定分别取第3、4、5代BMSC进行预诱导，具体方法为：六孔板中加入含1 mmol/LβME和20%胎牛血清的L-DMEM培养液。24 h后吸弃预诱导液。加入bFGF 20 ng/mL和10%胎牛血清。后行免疫细胞化学鉴定。3、实验动物的选择与处理3月龄大鼠十只为正常组，Morris水迷宫行隐蔽平台获得实验确立认知功能障碍大鼠标准：平均潜伏期较正常组延长20％以上者定义为认知功能障碍大鼠。15--22月龄大鼠Morris水迷宫行隐蔽平台获得实验筛选认知功能障碍大鼠40只，随机分生理盐水对照组、3代、4代、5代干细胞传代诱导后12小时上清液治疗组并行行为学检测，后分别海马注射生理盐水、三代、四代、五代干细胞传代诱导后12小时上清液3μl。注射上清后4周4组大鼠进再次行行为学检测。4、免疫组织化学染色测定CDK5表达程度。结果: 1、成功分离培养BMSC，传至3代后,细胞呈旋涡状排列的均一梭形，流式细胞仪检测符合MCS表型特征：检测CD29表达率为（99.7%）、CD44表达率为（99.8%）、CD34表达率为（2.3%）。2、诱导后细胞形态变化与免疫化学鉴定加入预诱导液24h后可以观察到一部分细胞胞膜胞质渐进性向胞核方向集中、收缩,移入bFGF后上述变化更加明显，可见突起形成。各组细胞均有部分细胞NSE阳性，表现为胞浆呈黄棕色，阳性率为42.50±6.40，GFAP染色后各诱导组出现极少量阳性细胞。3、水迷宫实验对注射前后定位巡航实验潜伏期差值行统计学分析，除三代组与五代组之间的差异无统计学意义外，其它任何两组间的差异均具有统计学意义（p0.05）,三代与五代上清液较四代效果明显。4、各组脑组织边缘系统CDK5表达情况Kruskal-Wallis检验可认为四组CDK5表达情况总体分布不同或不全相同（=32.046，P0.001）,进一步应用Wilcoxon秩和检验分别对四组行组间两两比较，除三代组与五代组间差异无统计学意义外，余各组间差异均有统计学意义，三代（平均秩和=5.50）与五代（平均秩和=5.50）上清液组较四代（平均秩和=6.00）CDK5表达阳性率低。结论：1、大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导后上清液对MCI大鼠有治疗作用。2、三代与五代上清液对mci大鼠治疗作用强于四代上清液。 【英文摘要】: Explore the Supernatant of three generations,four generations and fivegenerations of BMSC from rats to the nerve cell differentiation after 12h induction to thetherapeutic effect of mci-rats.Methods: 1.Segregation,culture and identification the BMSC. BMSC adopted the bone marrowto stick wall culture method, take the third generation of BMSC, adds CD29, CD44 and CD34antibody, the same type IgGI to contrast and comparison and the blank, detection by flowcytometric. 2. The induction and appraisal. Culture medium containing 0.2 volume fraction offetal bovine serum and 1 mmol/Lβ-mercapto-ethanol (β-ME) were used for 24-hourpre-induction and then take off the Culture medium and adds bFGF 20 ng/mL with 0.1 volumefraction of fetal bovine serum. Demonstrate by Immunocytochemistry. 3-month-old rats for t