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利用Agilent AdvanceBio 肽图分析色 谱柱进行高分离度的EPO 糖肽图分析 应用简报 生物制药 作者 摘要 James Martosella ，Phu Duong 及 2.7 µm Agilent AdvanceBio 肽图分析色谱柱专为改善多肽分离和肽图分析应用而设计。 Alex Zhu 该色谱柱采用了表面多孔技术，能 实现复杂多肽混合物的快速有效分离。本文以重组人 安捷伦科技公司 促红细胞生成素(rhEPO) 的胰酶分解物作为糖肽分析的消化物模型，展示了AdvanceBio 肽图分析色谱柱卓越的肽图分析性能。与很多蛋白治疗药物类似，rhEPO 在生产过程中 发生了修饰，因此表现出广泛的异质性。AdvanceBio 肽图分析色谱柱采用了优化的C18 涂层技术，能在一个很宽的洗脱范围内为多肽分析提供卓越的选择性和分离度，以增强 糖肽片段的分离，从而实现其快速、有效和灵敏的质谱分析。 前言 TOF MS 参数 在正离子、棒状图模式下采集谱图。 联用反相HP C 及电喷雾电离质谱(ESI/MS) 进行蛋白水解多肽的 肽图分析已成为鉴定生物治疗产品及确认其功效的首选方法 。 气体温度： [1] 350 °C 利用液相色谱 质谱联用 进行肽段分析是发布此类产品 / ( C/MS) 干燥气体： 10 /min 的重要前提，而且在完成蛋白表征策略中具有重要作用。例如， 为了确保重组蛋白治疗药物的稳定性，需要在整个保质期内长期 雾化器： 45 psi 监测药物产品的重要修饰，如糖基化修饰。糖基化分析虽然可在 毛细管电压： 3500 V 完整蛋白的水平上进行，但是糖肽图分析能提供其他重要信息， 碎裂电压： 170 V 例如序列信息、质量分析、以及糖基化位点的鉴定。 锥孔电压： 65 V 本文采用rhEPO 蛋白作为一种糖蛋白模型，利用2.7 µm AdvanceBio 肽图分析色谱柱对其进行高分离度的肽图分析和糖肽 C/MS 分析。 八极杆 1 RF ： 750 V MS: 4 Hz 该色谱柱是专为改善肽图分析应用中的分离问题所设计的，它可 为高效肽图分析 （例如rhEPO 肽图分析和增强糖肽发掘应用）提 质量数范围： 100 至7000 m/z 供更高的分离度、灵敏度和选择性。此外，2.7 µm 的表面多孔颗 参比质量： 149.02332 粒允许在较高流速下使用更长的色谱柱(2.1 ×250 mm) ，从而可 922.009798 在 HP C 级色谱柱压力下实现亚2 µm 粒径色谱柱的分离度。 采集模式：