两种石斑鱼的鉴别3.PDF

829 　 第 19 卷 　第 8 期 　2009 年 8 月 利用改良 Nesttetraprimer specif ic PCR 技术对 两种石斑鱼的鉴别 郭明兰 　苏永全 　张之文 　丁少雄 　王 　军 厦门大学海洋与环境学院海洋系 , 厦门 36 1005 ( ) ( ) 摘要 　　云纹石斑鱼 Ep i nep hel us m oa ra 和褐石斑鱼 E. br uneus 为石斑鱼属内近缘种 , 外形相 似常被混淆. 本研究改良建立了N e stt et rap rimer sp ecific PCR 方法 , 获得了云纹石斑鱼和褐石斑 ( ) 鱼线粒体 DN A ND2 基因内的 3 个特异性条带 , 分别为内参序列 N C1 394 bp 、特异性条带 ND2 M (268 bp ) 和 ND2B ( 122 bp ) , 以及核基因组中核糖体 DN A I T S1 区的 5 个特异性条带 , 分别为内 参序列 N C2 (588 bp ) 、N C3 ( 563 bp ) , 特异性条带 rDN AM (426 bp ) 、I T S1M (488 bp ) 和 I T S1B (304 bp ) . 研究结果不仅为两种石斑鱼的鉴别提供了稳定 、可靠 、快捷的特异性分子标记 , 而且也 为鱼类近缘种的DN A 鉴别提供了新的途径. 关键词 　　云纹石斑鱼 　褐石斑鱼 　ND2 基因　ITS1 区　Nesttetraprimer specif ic PCR 　　云纹石斑鱼 Ep i nep hel us m oa ra ( Temminck tion system PCR) , 是一种由普通 PCR 发展起来并专 Schlegel , 1842 ) 和 褐 石 斑 鱼 E . br u ne us ( Bloch , 门用于检测单核苷酸多态性的衍生技术. 该技术是以 ) ( ) 1793 同属鲈形 目 Percifor me s 、鮨科 Ser ranidae 、 扩增受阻突变系统 A RMS 为基础 , 综合四引物 PCR 石斑鱼属 Ep i nep hel us , 俗称分别为真油斑和假油 (tetrap rimer PCR) 技术的优点 , 对单核苷酸突变检 斑. 两种石斑鱼均为暖水性礁栖鱼类 , 主要分布于 测具有快速 、简便、可以区分等位基因是否纯合及费 我国沿海 、日本和韩国海域[ 1 , 2 ] , 为我国东南沿海 用低等特点[7 ] ; 目前主要用于医学上与疾病相关基因 重要养殖对象. 两种石斑鱼外形及地理分布非常相 多态性和基因型的研究[ 8 —12 ] . 本文据此改良建立了 似 , 有人提出它们为同种异名[2 , 3 ] . 在渔业生产上 一种新的鉴别近缘种的方法 Nesttetrap rimer specific 也经常出现混淆. 为此 , 作者对两种石斑鱼的形态 PCR ( 图 1)